前言:想要寫出一篇令人眼前一亮的文章嗎?我們特意為您整理了5篇預(yù)防醫(yī)學(xué)的目的范文,相信會為您的寫作帶來幫助,發(fā)現(xiàn)更多的寫作思路和靈感。
我母親在世時,除了高血壓、高血糖,還有就是不能用按摩椅做按摩,一做她就感覺背部疼,還有腳后跟痛。我?guī)е@個問題詢問了醫(yī)生。他是這樣解答的:腦部構(gòu)造是十分之精密且細致的,且血管要密密麻麻地包住腦部,才能將養(yǎng)分、氧氣準確地輸送到各構(gòu)造體。如果血管一旦有了斷裂,腦部就有部分地區(qū)輸送不到養(yǎng)分,或因淤血凝固,結(jié)成硬塊而擠壓到其他腦部部分及血管,就會發(fā)生身體機能障礙,因此中醫(yī)認為此病是風邪侵入腦部所致,故稱之為中風。中風之病因在于,血管斷裂且血液流出,所以腦部血管斷裂,在西醫(yī)上稱之為腦溢血。
中醫(yī)論斷:腦溢血,又稱腦出血,它起病急驟,病情兇險,死亡率非常高,是急性腦血管病中最嚴重的一種。腦溢血發(fā)病主要原因是長期高血壓、動脈硬化,絕大多數(shù)患者發(fā)病當時血壓明顯升高,導(dǎo)致血管破裂,引起腦出血。有時不見得就是在頭部,有絕大多數(shù)因身體背部疼痛為風邪侵入沒治愈所致。而背部又是足太陽膀胱經(jīng)為風邪所經(jīng)之路,且傷寒論又以足太陽膀胱經(jīng)為風邪侵入第一站,如若風邪在背部集結(jié)呈現(xiàn)疼痛,造成由背部靜脈血行壓力增加上沖腦部,加重了腦血管的負擔,加之大便梗塞用力所致,使腦血管斷裂,于是出現(xiàn)了我母親病發(fā)的情況……
腦昏迷后總結(jié)注意事項:
一發(fā)現(xiàn)患者昏迷不能背下樓,最好用擔架平穩(wěn)地下樓;
二治療時家屬要注意讓患者平躺不要多動彈,以防止進一步出血;
三應(yīng)在當?shù)剡M行搶救,不宜長途運送及過多搬動,以免加重出血(在這個問題上我們兄妹三個犯了一個大錯誤,因不知道長途搬運會加重)。
那么如何預(yù)防腦溢血呢?
情緒不能過于激動,精神極度緊張或興奮、看恐怖片、用力排便等等因素促使血管破裂,血壓突然增高所致的腦溢血。
積極預(yù)防腦溢血,對于保障身體健康是重要的原因。怎樣預(yù)防腦出血呢?做到以下“十必須”。
一必須保持樂觀,心態(tài)積極向上,防止血壓上升和動脈硬化,避免精神緊張和疲勞;
二必須保證足夠睡眠時間,合理安排生活節(jié)奏及飲食;
三必須早期治療,保持血管的彈性,每年按時輸脈絡(luò)寧,軟化血管,吃降壓片,少吃高脂肪食品,還有一點要注意的就是吃雞蛋要少吃蛋黃,蛋黃的膽固醇較高;
四必須適當?shù)貐⒓芋w育鍛煉,貴在堅持,最好的運動是步行,但步行不能太遠,從事輕微的力所能及的活動;
五必須保持大便暢通,多飲水,血糖高者要選擇性吃水果、蔬菜等以軟化糞便,避免過度用勁排大便,以免血壓突然增高;
六必須早發(fā)現(xiàn)早治療。定期檢查,積極采取措施,穩(wěn)定或降低血壓,防止血壓突然增高;
七必須動作緩慢,防止頭部一時供血不足而發(fā)生意外,如彎腰、蹲下、起身、臥床或改變時,可用眼睛向下方式或頭低位漸漸起身,切忌突然改變;
八必須預(yù)防季節(jié)變化對自身的影響,避免使血管舒縮功能發(fā)生障礙、血壓波動幅度加劇而發(fā)生意外;
九抽煙喝酒對于高血壓患者能引起血管痙攣,加速動脈硬化,長期大量飲酒會促使動脈硬化,甚至促使血管破裂;
十必須清淡飲食,可多吃水果、魚類、豆類、蔬菜等,尤其對動脈硬化、血脂、血壓較高者更為重要。動物脂肪或膽固醇含量高的食物應(yīng)盡量少吃或不吃。
預(yù)防腦溢血除應(yīng)牢記“十個必須”外,還要堅持合理用藥,并注意發(fā)病的規(guī)律,采取防范措施,減少腦溢血的發(fā)生幾率。
為這事我還走訪了母親的主治醫(yī)生,醫(yī)生說:“一般的老人發(fā)現(xiàn)腦梗塞后,即使自己身體再好,也要定期輸脈絡(luò)寧等擴血管和活血化淤的藥,讓腦部不再增加梗阻……預(yù)防便秘,多吃一些富含纖維的食物,如青菜、芹菜、韭菜及水果等。但血糖高的人不宜吃甜性水果,也可做適當?shù)倪\動及早晨起床前腹部自我按摩……醫(yī)學(xué)研究表明,腦溢血最容易發(fā)生在血管比較脆弱的右腦半球,所以防范腦溢血的發(fā)生,最好的辦法是在早晚時分。還有就是鍛煉自己的左手,使小腦發(fā)達起來,可以很有效地防止腦溢血!”
有腦血栓的患者需要注意,為減少血液黏稠度增高,早晚都應(yīng)多喝水;便秘會導(dǎo)致血壓升高和心臟負荷,誘發(fā)中風,所以平常應(yīng)多吃蔬菜瓜果,保持大便通暢,中老年人最好多散步,多吃芹菜,芹菜葉子降壓功效比較高,有些苦,但是用開水一燙,用鹽、香油一拌還是挺好吃的。適當?shù)貐⒓芋w育鍛煉,可以使血壓、血糖下降,預(yù)防腦溢血的發(fā)生。
我母親腦溢血去世是因高血壓、背部風邪所致大便梗塞,使腦血管斷裂導(dǎo)致大面積出血所致。
我母親去世太快了,她不該不住院治療,去年在醫(yī)院,沒住多長時間就鬧著出院了。我去看她,找她談了好多利害關(guān)系,她答應(yīng)過幾天就輸液治高血壓、腦血栓,結(jié)果事與愿違,一波未平一波又起,左手粉碎性骨折,耽擱了治療。走了,連她自己也想不到這么快就走了……
關(guān)鍵詞:移動慕課;移動學(xué)習;世界大學(xué)城;Android;jsoup
中圖分類號:TP311
1 世界大學(xué)城、“慕課”與移動教學(xué)
世界大學(xué)城是一座網(wǎng)絡(luò)虛擬城市。綜合了遠程教學(xué)、網(wǎng)絡(luò)辦公、及時通訊、商務(wù)管理、全民媒體、個性化數(shù)字圖書館等功能的一座既虛擬又真實的大學(xué)社區(qū)平臺,是全民終生學(xué)習的校園。
慕課(MOOC)近兩年來備受國內(nèi)外教育界的關(guān)注,發(fā)展迅速?!澳秸n”是開放教育領(lǐng)域出現(xiàn)的一種新課程模式,具有開放、大規(guī)模、課程要素完整、強調(diào)交互的基本特征[1]。
移動學(xué)習是指利用無線移動通信網(wǎng)絡(luò)技術(shù)以及無線移動通信設(shè)備獲取教育信息、教育資源和教育服務(wù)的一種新型學(xué)習形式。移動學(xué)習必將成為高等教育中必不可少的、顯著提高教學(xué)效果、增強自主學(xué)習能力的學(xué)習手段之一[2]。
2 移動“慕課”主體內(nèi)容建設(shè)要求
移動“慕課”――移動學(xué)習方式與“慕課”課程建設(shè)結(jié)合起來的新型學(xué)習方式。充分利用隨身攜帶的移動設(shè)備終端,無處不在的無線網(wǎng)絡(luò)進行隨時隨地的學(xué)習,充分提高教學(xué)效果,增強學(xué)生自主學(xué)習能力。
移動“慕課”的建設(shè)包括兩個方面[3]。
2.1 建設(shè)“慕課”課程服務(wù)平臺
“慕課”課程服務(wù)平臺即WEB服務(wù)器,提供課程建設(shè)必要的數(shù)據(jù)存儲、數(shù)據(jù)訪問等服務(wù)。通過WEB服務(wù)器平臺,對外開放。其中具體包括視頻播放服務(wù),學(xué)習社區(qū)和課程答疑等在線交互服務(wù)。
2.2 建設(shè)“慕課”課程資源
“慕課”課程資源于平臺無關(guān),主要包括授課章節(jié)微視頻[4] [5],授課講義,授課章節(jié)測試題,綜合測試題等相關(guān)課程資源內(nèi)容。
3 世界大學(xué)城空間與移動“慕課”課程建設(shè)
一般的院校沒有大規(guī)模的資金來支撐“慕課”平臺的建設(shè)。但每個院?,F(xiàn)在都有自己的大學(xué)城空間。我們的目的就是將放在世界大學(xué)城空間上的資源課程放在移動設(shè)備上以構(gòu)建移動“慕課”課程,即將世界大學(xué)城空間作為資源的服務(wù)平臺。下面以Android移動端來示例基于世界大學(xué)城空間的移動“慕課”課程建設(shè)過程[6]。
3.1 基于jsoup的模擬登錄
我們首先找到世界大學(xué)城空間的首頁。在這個頁面上有個表單,填寫對應(yīng)的用戶名和密碼可以實現(xiàn)登錄。我們在這個頁面上通過jsoup包在Android端來模擬這個登錄過程。
關(guān)鍵代碼如下:
Response res=Jsoup
.connect("().indexOf("OK")>=0){//登錄成功
//將cookie存入全局變量中,
//在下一次請求其它頁面時隨請求地址發(fā)到服務(wù)端。
MyApp myApp = ((MyApp)getApplicationContext());
myApp.setLoginCookies(loginCookies);
3.2 視頻資源建設(shè)
視頻是“慕課”課程建設(shè)的主要內(nèi)容。世界大學(xué)城空間支持廣泛格式視頻的上傳,但上傳至視頻欄目下的視頻不能實現(xiàn)在移動端的播放。而在文章欄目中又不能上傳FLV格式的文件,所以作者在文章欄目中將SWF格式的視頻文件作為附件上傳至大學(xué)城空間,上傳成功后我們可以取得文件的下載地址,然后在Android端通過WebView組件來實現(xiàn)SWF格式的視頻文件的播放。WebView播放SWF文件有兩種方式:loadUrl 和loadDataWithBaseURL。loadUrl方式不支持播放進度的控制。loadDataWithBaseURL支持暫停,繼續(xù)以及前進和后退播放。
3.3 測試題試卷建設(shè)
每個章節(jié)內(nèi)容都要安排測試題進行練習。世界大學(xué)城空間提供了測試題庫的建設(shè),我們可以把測試題庫存儲在世界大學(xué)城空間中。客戶端通過jsoup去抓取相關(guān)題庫內(nèi)容并比對答案。在得到的Document對象中,使用select方法查找名稱為questions的所有試題列表結(jié)點。
3.4 學(xué)習社區(qū)交互建設(shè)
“慕課”課程建設(shè)還有個顯著的特點是用戶可以在線相互交互答疑功能。我們可以充分利用世界大學(xué)城空間的“教研苑”來完成這個功能。
首先,我們在“教研苑”中建立某門課程的討論區(qū),然后基于此討論區(qū)資源建設(shè)基于移動設(shè)備的訪問界面。包括模擬回復(fù)和取得所有回復(fù)功能。
3.4.1 模擬回復(fù)
通過查看討論區(qū)所在網(wǎng)頁的源代碼,我們可以找到處理回復(fù)的頁面。我們需要先通過解析回復(fù)的初始頁面得到"__VIEWSTATE"和"__EVENTVALIDATION"這兩個隱藏域的內(nèi)容,然后跟Android界面上的回復(fù)內(nèi)容一起提交。關(guān)鍵實現(xiàn)代碼如下:
Jsoup.connect(url).data(
"__VIEWSTATE",doc.select("input#__VIEWSTATE").val(),
"__EVENTVALIDATION",doc.select("input#__EVENTVALIDATION").val(),
"btnTopicReply","回復(fù)",
"txt_Topic_Reply",textMsg.getText().toString())//回復(fù)內(nèi)容
.cookies(myApp.getLoginCookies())
.method(Method.POST)
.execute();
3.4.2 取得所有回復(fù)
取得回復(fù)也是基于jsoup包的抓取網(wǎng)頁內(nèi)容的方式獲得,首先通過Jsoup得到回復(fù)頁面的Document對象,然后調(diào)用select方法查找所有回復(fù)列表結(jié)點,選擇器字符串為“ul#divTopicReplyList>li”。
4 結(jié)束語
文章介紹了移動“慕課”課程的建設(shè)內(nèi)容與方案,闡述了一種基于世界大學(xué)城建設(shè)移動“慕課”課程的方法,并對其關(guān)鍵實現(xiàn)做了闡述。后續(xù)將研究并實現(xiàn)一種通用的基于世界大學(xué)城建設(shè)移動“慕課”的軟件框架,讓非計算機教師也能建設(shè)屬于自己的移動“慕課”課程。
參考文獻:
[1]殷丙山,李玉.慕課發(fā)展及其對開放大學(xué)的啟示[J].北京廣播電視大學(xué)學(xué)報,2013(05):29-34.
[2]占莉娟.移動學(xué)習在高職院校的應(yīng)用探析[J].武漢交通職業(yè)學(xué)院學(xué)報,2013(03):22-26.
由于受母語的影響,英語學(xué)習者往往錯誤地認為漢語的一些語言屬性可以直接等同英語的語言屬性。在英語寫作中,學(xué)習者很容易混淆、重復(fù)一些詞匯的含義而且傾向于使用動詞結(jié)構(gòu)等。從語言學(xué)和文化的角度看,英語和漢語這兩種語言確實存在差異,英語學(xué)習者的英語寫作會受到漢語思維模式的影響。母語負遷移在中國學(xué)生大學(xué)英語寫作中是一個很常見的問題。
二、寫作中的典型錯誤
研究表明,漢語對英語寫作的負遷移表現(xiàn)在以下幾個方面:寫作中的錯誤包括主謂一致,被動語態(tài),冠詞的使用,名詞的單復(fù)數(shù),時態(tài),狀語的位置和不恰當?shù)臐h英翻譯等等。在英語寫作過程中,由于母語負遷移造成的常見錯誤,可以歸納為三類:詞匯層面,句法層面和語篇層面。
1.詞匯層面
每一種語言都有自己獨特的詞匯搭配規(guī)則和句子組成規(guī)則。漢語和英語屬于兩種不同的語言體系,漢語屬于漢藏語系,英語屬于印歐語系。當然,它們有不同的語言規(guī)則。由于不同的歷史背景和不同的文化,不同的語言被賦予了不同的內(nèi)涵,漢語和英語中的詞匯不可能是一一對應(yīng)的。漢語為分析性語言,詞尾無語法變化,注重意合,通常使用虛詞顯示語法功能。英語為綜合性語言,注重形合,在英語中,詞干加上相應(yīng)的詞綴來表達不同的含義和相應(yīng)的語法功能。
一般來說,漢語的負遷移在詞匯層面表現(xiàn)為以下幾個方面:冠詞的使用;名詞的單復(fù)數(shù)形式;動詞和時態(tài);詞匯的使用等。
2.句法層面
由于英語句法知識的缺乏,中國的英語學(xué)習者通常依靠熟悉的和已經(jīng)內(nèi)化的漢語句法知識,然后用英語表達自己的思想,深受漢語思維模式的影響。因此,當漢語句法系統(tǒng)與英語句法系統(tǒng)存在差異時,句法層面的負遷移就出現(xiàn)了。就句子的詞序來說,英語句子的詞序主要是主語――謂語動詞――賓語(SVO)的順序,然而漢語句子的詞序很大程度上是由句子的意義來決定的。因此,在漢語中,主語和謂語動詞的順序更加靈活。在英語的否定句中,重要的否定結(jié)構(gòu)出現(xiàn)在助動詞之后,然而在漢語中,主要的否定結(jié)構(gòu)出現(xiàn)在動詞之前。就語法來說,漢語和英語在語法形式上有很多的不同。對中國學(xué)生掌握英語句型,單詞的各種形式,時態(tài)變化和邏輯語法連詞(例如介詞,連詞,副詞,關(guān)系代詞和關(guān)系副詞等)造成了很大的困難。此外,漢語中沒有冠詞,而且介詞在漢語和英語中的用法都很不同。受此影響,當中國學(xué)生在使用英語時,句子中缺少冠詞和介詞是很常見的現(xiàn)象。對于句子結(jié)構(gòu),漢語和英語基本的句子結(jié)構(gòu)有很大的相似之處,甚至可以說是相同的。所以很容易使學(xué)習者養(yǎng)成生搬硬套的學(xué)習習慣,出現(xiàn)母語的負遷移。
3.語篇層面
語篇結(jié)構(gòu)趨于中式英語。漢英思維模式彼此不同,從而導(dǎo)致語篇結(jié)構(gòu)上的不同。以英語為母語的人,他們往往在文章的開頭就直接點出論點,并提出自己的想法,說明他們的寫作意圖。通常文章的開頭和結(jié)尾有序呼應(yīng),文章有明晰的脈絡(luò)。然而以漢語為母語的人,他們的思維模式充滿了曲折和轉(zhuǎn)彎,整個語篇是S型的。我們的學(xué)生在寫作中更關(guān)心的是主要內(nèi)容是不是都寫出來了,而很少會花時間注意文章的組織和結(jié)構(gòu)。因此,閱讀這些學(xué)生的文章,我們幾乎無法找到任何的段落主題句。
英語和漢語屬于不同的語系,語言差別很大。英語語篇更加連貫,漢語語篇有更多松散的句子結(jié)構(gòu)。如果英語語篇中缺乏連詞諸如but,because,in addition等,就會使意思顯得不完整。但是在漢語中,即使沒有連詞,句子的意義也可以表達觀點之間的關(guān)系。
三、母語負遷移對大學(xué)英語寫作的影響
大學(xué)英語寫作中母語負遷移是一個普遍現(xiàn)象,也是問題的根源之一。它造成了很多的錯誤,并不同程度地涉及許多方面,從詞匯到句子,從思想到文化,從而導(dǎo)致了很多不符合英語語言習慣的表達,甚至有時候可能會造成溝通的障礙。也許大學(xué)英語寫作更多的是一個漢英翻譯的過程而不是寫作過程。寫作中,沒有使學(xué)生形成用英語去思維,學(xué)生更多的是先在大腦里形成漢語的提綱,然后把它翻譯成英文,這將會導(dǎo)致更多的中式英語,并且降低文章的統(tǒng)一性和連貫性。
四、基于母語負遷移影響的大學(xué)英語寫作教學(xué)
大學(xué)英語寫作教學(xué)是一個雙向的過程――教師教和學(xué)生學(xué)。母語負遷移雖然不可能完全避免,但是教師和學(xué)生可以嘗試最大限度地減少其影響。這對所有的英語教師和學(xué)習者來說都是一個具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。
1.教學(xué)過程的改進
(1)教學(xué)目標的轉(zhuǎn)變
很多英語教師認為英語是一門學(xué)科,而非溝通的工具。教學(xué)目標不是提高學(xué)生使用語言的能力,而重點始終放在如何提高學(xué)生的考試成績。在短時期內(nèi),對學(xué)生應(yīng)試如參加一些等級考試很有幫助,然而從長期來看,它確實會對學(xué)生學(xué)習英語造成不好的影響。寫作,作為一種書面的溝通方式,傳達思想,價值和文化等。因此,教學(xué)目標應(yīng)該轉(zhuǎn)移到如何實現(xiàn)學(xué)生用英語溝通的能力上來。在大學(xué)英語課堂教學(xué)中,教師應(yīng)該給學(xué)生提供更多的使用和練習英語的機會,旨在培養(yǎng)他們的綜合語言能力。
(2)著重英語和漢語之間的比較
由于英語和漢語這兩種語言之間的差異是導(dǎo)致母語負遷移的關(guān)鍵因素之一,在大學(xué)英語教學(xué)過程中,教師最好能對這兩種語言進行比較。例如,教師可以呈現(xiàn)一些母語負遷移的例子,并且告訴學(xué)生英漢語在語法和語篇上的差異。同時,教師可以列舉英漢語之間的相似性,以幫助學(xué)生利用母語正遷移來掌握英語。在兩種語言比較的過程中,學(xué)生可以從一個不同的角度領(lǐng)會英語,從而更好的理解英語,培養(yǎng)他們的語感,在寫作中更好地注意英漢語的差異。
(3)作文評分模式的改變
教師在給作文評分的過程中,僅僅打一個分數(shù)和寫一些評語是不夠的。這樣會很容易使學(xué)生忽略他們作文中的缺陷以及他們所展現(xiàn)的才華。為了讓學(xué)生意識到作文中的錯誤,教師可以在評分的過程中幫助他們改正錯誤,或者讓學(xué)生互相批改,指出錯誤。而且評語要盡可能地詳細。以這樣的方式,學(xué)生不僅可以多加留意錯誤,而且對英漢語之間的差異有了更深的印象。另外,教師對于有寫作困難的學(xué)生,要多鼓勵他們,多開展一些課堂寫作活動,提高他們對寫作的興趣,而不是給個低分就行。
2.學(xué)習過程的改進
(1)詞匯的積累
詞匯是語言學(xué)習最重要的部分之一。大學(xué)英語學(xué)習者的多數(shù)寫作錯誤都是由于詞匯的缺乏造成的。為了擴大詞匯量,很多學(xué)生只是單獨背單詞,而且發(fā)現(xiàn)很難記住這么多單詞。其實,更好的方法是用眼睛,耳朵,嘴巴和手一起背單詞。眼睛需要多閱讀,多看;耳朵需要多聽錄音和廣播;嘴巴需要經(jīng)常背誦;手可以在背誦過程中邊寫邊劃。在語境中學(xué)習和鞏固詞匯也是可行的。此外,學(xué)生還可以培養(yǎng)對詞匯進行分類的習慣。
(2)增加語言輸入
語感在短期內(nèi)很難培養(yǎng),但是在語言學(xué)習中很重要。對于大學(xué)英語學(xué)習者來說,增加語言輸入可以培養(yǎng)語感。眾所周知,每個星期,大學(xué)英語學(xué)習者每個人只有四節(jié)或者六節(jié)英語課,平均每個人只有兩個小時或更多的作業(yè)時間。這對學(xué)好英語是遠遠不夠的,大學(xué)英語課堂只是最基本的部分,教師只能起到引導(dǎo)作用。為了擴大和深化英語語言知識,下課后,學(xué)生可以根據(jù)自己的英語水平,涉獵更多更豐富的英語材料。閱讀,作為一種有效的方法,學(xué)生接收更多第一手的資料,更新鮮、更真實的語言材料,不僅可以擴大學(xué)生的詞匯量和視野,也可以提高他們的英語閱讀能力和寫作能力。此外,對培養(yǎng)語感也很有幫助。
【關(guān)鍵詞】 瘢痕疙瘩 家系 EB病毒 B淋巴細胞
0引言
瘢痕疙瘩的診斷和治療是整形外科領(lǐng)域研究的重點和難點之一. 近年研究表明,瘢痕疙瘩的形成具有明顯遺傳傾向,故我們擬以東北一瘢痕疙瘩家系為對象進行相關(guān)遺傳學(xué)研究. 為有效的保留此家系的DNA資源,我們采用EB病毒(EpsteinBarr virus, EBV)轉(zhuǎn)化技術(shù),分別用環(huán)孢霉素 A(CysA)法、微量全血法和凍存全血法將樣本外周血B淋巴細胞轉(zhuǎn)化成永生化淋巴母細胞系(lymphoblastoid cell lines, LCL),建立了此家系的外周血淋巴細胞永生細胞庫,并對此3種轉(zhuǎn)化方法進行了比較和評價.
1材料和方法
1.1材料
產(chǎn)生EBV的B958細胞株由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所徐玖瑾教授饋贈,RPMI 1640培養(yǎng)基(Gibco公司);特級胎牛血清(HyClone公司);淋巴細胞分離液,環(huán)孢霉素A及二甲基亞砜(Promega公司);FITC標記的鼠抗人CD19 mAb和PE標記的鼠抗人CD23 mAb及同型對照(法國ACOULTER公司). 此瘢痕疙瘩家系來自我國東北,所有成員均有完整詳細的資料. 共采集了包括先證者所在核心家庭及發(fā)病人數(shù)較多的一個家庭共4代28個成員的外周血標本,男女比率3∶4,年齡3~76歲,其中瘢痕疙瘩患者5例,病程10~30 a不等. 所有血樣都在無菌條件下抽取,常溫帶回實驗室.
1.2方法
1.2.1EBV懸液的制備
復(fù)蘇B958細胞株,加入無血清RPMI 1640,1000 r/min離心10 min,棄上清,加入RPMI 1640完全培養(yǎng)基培養(yǎng). 每2~3 d半量加液1次,待細胞數(shù)達到1×1010/L時,饑餓細胞4~7 d,收集上清液,-70℃及37℃反復(fù)凍融3次, 1800 r/min離心15 min,0.22 μm濾膜抽濾,-70℃冰箱保存?zhèn)溆?
1.2.2CysA法
取5 mL肝素抗凝血,室溫放置24 h,加入2 mL無血清1640培養(yǎng)液,混勻,沿管壁小心加在4 mL淋巴細胞分離液上,2500 r/min離心30 min,將白細胞層輕輕吸出后移入另一試管中,加入10 mL無血清1640培養(yǎng)液洗滌3次,然后將洗滌后的白細胞用2 mL RPMI 1640完全培養(yǎng)基重懸,加入1.3 mL EBV懸液和0.4 mL CysA,充分混勻后等量移入2個10 mL培養(yǎng)瓶內(nèi),置于37℃,50 mL/L CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng);7 d左右鏡下觀察, 此后每周兩次半量換液;約2 wk后轉(zhuǎn)瓶,繼續(xù)培養(yǎng)、換液和傳代. 至細胞數(shù)達到(4~6) ×109/L時,在完成染色體核型分析后可收集細胞進行凍存,建株完成.
1.2.3微量全血法
取0.1 mL肝素抗凝血,直接加1.0 mL EBV懸液及1 mL RPMI 1640完全培養(yǎng)基,置于37℃,50 mL/L CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng);每周加0.5 mL RPMI 1640完全培養(yǎng)基. 3~4 wk后可在紅細胞背景中觀察到淋巴細胞體積增大,形似母細胞樣的細胞團或單個細胞散在分布. 此后每3~5 d半量換液,直至紅細胞及碎片基本清除,淋巴細胞大量增生.
1.2.4凍存全血法
取抗凝全血0.9 mL,加入100 mL/L二甲基亞砜(DMSO),混合后置-70℃低溫冰箱2 d內(nèi)移至液氮中,每個樣本凍存2~3支. 1 mo后,將凍存血標本從液氮中取出,置37℃水浴中迅速解凍,用10 mL無血清RMPI 1640培養(yǎng)液1000 r/min離心2 min,棄上清,留沉淀細胞;用2 mL含RMPI 1640完全培養(yǎng)基懸浮細胞,加入1 mL EBV懸液,混合后移入10 mL培養(yǎng)瓶內(nèi),置于37℃,50 mL/L CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),根據(jù)轉(zhuǎn)化和細胞生長情況加液、換液、轉(zhuǎn)瓶和傳代.
1.2.5轉(zhuǎn)化細胞株的凍存與復(fù)蘇
細胞株在凍存前一天必須加新鮮的培養(yǎng)液,24 h后收集細胞至離心管中,1000 r/min離心10 min,棄上清,用1 mL凍存液(950 mL/L的胎牛血清+50 mL/L的二甲基亞砜)重懸細胞,放置-70°C的冰箱1 h后或隔夜進入液氮柜中保存. 細胞復(fù)蘇時迅速將凍存管放入37℃水浴,當凍存管中尚存有少量冰塊(約0.4 cm×0.3 cm×0.2 cm)時立即進入超凈臺中,整個時間約1 min左右,解凍后的細胞直接進入全培養(yǎng)液中,無須離心洗滌. 核對培養(yǎng)瓶上標記的細胞代碼、號數(shù)及凍存日期后,置入37℃培養(yǎng)箱內(nèi),細胞可連續(xù)傳代培養(yǎng)6 mo以上.
1.2.6細胞株染色體核型分析
對轉(zhuǎn)化前后及培養(yǎng)3~6 mo的細胞進行染色體核型分析,取指數(shù)增殖期的淋巴細胞懸液5 mL注入另一培養(yǎng)瓶中,加入完全培養(yǎng)基5 mL,37℃培養(yǎng)48 h,加入秋水仙堿,終濃度為0.4 g/L,繼續(xù)培養(yǎng)2 h后,常規(guī)收獲、制片,G顯帶后進行染色體核型分析并顯微照相.
1.2.7LCL細胞膜表面標志鑒定
CD19和CD23分子的檢測,5×106的LCL經(jīng)PBS洗滌2次,200 μL PBS重懸,分別與FICT和PE標記的CD19和CD23 mAb避光孵育45 min,同時設(shè)相應(yīng)的陰性同型對照. PBS洗2次,流式細胞儀檢測1×105個細胞,分析細胞膜上CD19和CD23分子的表達.
2結(jié)果
2.1不同方法轉(zhuǎn)化情況轉(zhuǎn)化
瘢痕疙瘩家系28例外周血標本,CysA法、微量全血法和凍存全血法的建系成功率分別為96.4%,46.4%和28.6%;建系平均所需時間分別為28.8 d,39.7 d和46.3 d. 微量全血法和凍存全血法相比無顯著性差異(P>0.05),兩者與CysA法比較,有顯著性差異(P
2.2EBV轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化后的細胞在倒置顯微鏡下觀察,可見細胞體積增大,呈球狀,胞質(zhì)豐富,呈明顯的團狀或簇狀增生,標志轉(zhuǎn)化成功(圖1A).
2.3凍存細胞復(fù)蘇后生長情況及染色體核型
所有凍存后的細胞復(fù)蘇成功率都為100%,復(fù)蘇后第3日即可傳代,鏡下觀察細胞形態(tài)正常. 細胞轉(zhuǎn)化前后及培養(yǎng)傳代3~6 mo后分別進行染色體G顯帶分析未見異常(圖1B),表明轉(zhuǎn)化后細胞核型穩(wěn)定,保留了原有遺傳標志.
2.4LCL細胞膜表面標志CD19和CD23的表達
流式細胞儀檢測結(jié)果表明,分別有77.5%和74.0%的細胞膜上表達了CD19和CD23(圖2).
3討論
瘢痕疙瘩患者多呈散發(fā),家族性發(fā)病率僅3%左右[1]. Marneros等[2]通過對14個瘢痕疙瘩家系的分析研究,認為其呈常染色體顯性遺傳伴不完全外顯,并非簡單的孟德爾式單基因遺傳.瘢痕疙瘩的形成可能是易感基因與外源性因素共同作用的結(jié)果[3].通過發(fā)病家系的分子遺傳學(xué)研究,將為尋找其相關(guān)易感基因提供直接、高效的途徑,對于揭示瘢痕疙瘩發(fā)病機制具有重大意義. 完整的疾病家系標本的采集是家系研究的關(guān)鍵,但因家系成員居住分散、不配合和費用昂貴等因素,重復(fù)采樣往往十分困難,難以滿足長期研究的需要. EBV轉(zhuǎn)化B淋巴細胞建立永生化淋巴母細胞系的技術(shù)有效解決了這一問題. EBV基因組似質(zhì)粒一樣以500~800拷貝存在于每個細胞中,對宿主細胞DNA多無影響[4]. 因此,用EBV轉(zhuǎn)化人外周血B淋巴細胞,使其成為一種能持續(xù)生存、分裂的類淋巴母細胞,該類淋巴母細胞能夠保存原血樣個體的完整基因信息[5] ;此方法是在體外獲得無限量B細胞及保存遺傳信息的有效手段[6].
正常人群(包括幼兒及成人)中血清EBV抗體90%以上是陽性,EB病毒轉(zhuǎn)染過程中,由于記憶性T淋巴細胞被激活,對感染的B淋巴細胞起殺傷作用而使之不能轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)化細胞集落迅速退化[7-8]. 為避免此類現(xiàn)象的發(fā)生,通常采用以下方法:①低密度接種轉(zhuǎn)化細胞,以減少淋巴細胞接觸機會,如本實驗中的微量全血法. ②加入CysA. CysA是一種高效免疫抑制劑,可在G0到G1期之間選擇性抑制T淋巴細胞RNA聚合酶Ⅱ,使T淋巴細胞失去了對EBV感染的免疫反應(yīng),有效地防止了已轉(zhuǎn)化的B淋巴細胞的退化[9]. 本研究采用三種方法均獲得了BLCL,EBV感染后能觀察到淋巴細胞增大明顯母細胞化,進而增殖的淋巴母細胞凝聚成團;并且能成功的傳代、凍存和復(fù)蘇,這些都是建系成功的標志.
比較三種方法,CysA法不論是在轉(zhuǎn)化成功率還是在轉(zhuǎn)化時間方面都明顯優(yōu)于微量全血法和凍存全血法,是建立LCL的可靠方法. 在本實驗中,微量全血法轉(zhuǎn)化率略高于凍存全血法,這與以往的文獻報道不一致. 微量全血法不用分離淋巴細胞,也不用加CysA,此方法建系成功可能是因為血液量少,使淋巴細胞接觸機會減??;而凍存全血法同樣也具有用血量少,不用CysA和分離淋巴細胞等優(yōu)點,但其轉(zhuǎn)化效率最低,可能與凍存后降低了細胞活力及破壞了部分細胞有關(guān). 但鑒于此方法可以克服新鮮血運送困難的難題,可作為CysA法的有限補充. 在實驗過程中我們發(fā)現(xiàn),EBV對淋巴細胞轉(zhuǎn)化成功與否除與轉(zhuǎn)化方法相關(guān)外,還與樣本中存活的淋巴細胞數(shù)量有直接的關(guān)系. 在血液運送過程中,只要保持溫度恒定(20℃左右),48 h內(nèi)轉(zhuǎn)化其效率都是肯定的. 所以在建立家系樣本的永生細胞系時,最可靠的方法是CysA法和凍存全血法聯(lián)合應(yīng)用,最大限度地保證轉(zhuǎn)化成功率.
本研究對轉(zhuǎn)化后的細胞膜表面分子CD19和CD23用流式細胞儀進行分析,分別有77.5%和74.0%的永生化B淋巴細胞膜上表達了CD19和CD23分子. CD19是所有B細胞共有的表面標志,CD23主要存在于激活的B細胞表面,是B細胞活化的標志. 在EBV感染的早期,可根據(jù)B細胞CD23表達與否來判斷B細胞能否在體外長期培養(yǎng)[10].
我們通過三種方法摸索并成功建立了瘢痕疙瘩家系外周血B淋巴細胞系,為將來的瘢痕疙瘩發(fā)病機理的研究提供了有效的資源,并對用EBV轉(zhuǎn)化的方法保存遺傳資源提供了寶貴的經(jīng)驗和有效的指導(dǎo).
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關(guān)鍵詞:教育教學(xué);問題;解決方法;對策
在近幾年中,高職教育教學(xué)的發(fā)展較為迅速,它的發(fā)展影響著我國教育事業(yè)的進程,而且為社會文明化作出了重要的貢獻。高職教育在這樣快速發(fā)展的模式下,需要注重提高W生人文素養(yǎng)的發(fā)展以及實踐能力的鍛煉,并且學(xué)校在師資力量方面也需要做出一定調(diào)整,提高師資能力水平。高職教育作為以培養(yǎng)高技術(shù)的應(yīng)用型人才為目標,來達到滿足社會經(jīng)濟發(fā)展的需求。所以對于高職教育的過程必須重視,關(guān)于如何使學(xué)生得到全面性發(fā)展、實踐教學(xué)應(yīng)如何進行以及如何做到滿足市場需求等。我們將帶著這些問題點對高職教育教學(xué)進入深入認識。
認識目前高職教育教學(xué)中存在的問題
一、師資力量薄弱,課程體系不完善
1、目前在我國的各個高職學(xué)校里,專業(yè)課老師相對來說會比較少一些。在高職學(xué)校我們經(jīng)常可以看到,專業(yè)課的老師可能會帶所有班級的課甚至于所有年級的課,而且在學(xué)校一個專業(yè)里面專業(yè)課老師僅僅只有以兩位而已,這完全達不到高職教育教學(xué)的要求。由于專業(yè)課老師較少的原因,學(xué)生班級多,專業(yè)課安排多,導(dǎo)致專業(yè)課老師在上課中就會出現(xiàn)教學(xué)質(zhì)量下降的現(xiàn)象,以及學(xué)生學(xué)習專業(yè)知識不夠全面或是遇到問題不能及時得到解決。而且高職學(xué)校中很多專業(yè)課老師多數(shù)為剛畢業(yè)的大學(xué)生,對于其專業(yè)沒有一定的經(jīng)驗積累,所以在任教其專業(yè)課中會有一定壓力,同時學(xué)生對本專業(yè)的學(xué)習也受到一定影響。
2、說到專業(yè)課相信大家并不陌生,但是在大多數(shù)學(xué)生看來,專業(yè)課學(xué)習起來比較困難。對于這個現(xiàn)象原因在哪呢?這個問題值得我們深思,然而接受過高職教育的學(xué)生應(yīng)該比較容易想到這個問題的原因。高職教育的學(xué)科中所有知識點都比較抽象化,不容易被學(xué)生所理解,而且太多的專業(yè)知識沒有結(jié)合實際需求所用,這些專業(yè)知識的理論性比較強,但在實際運用當中卻少之甚少。高職教育的方向是培養(yǎng)應(yīng)用型人才,在學(xué)習專業(yè)性理論知識的同時,應(yīng)加強動手能力的鍛煉。所以說目前高職教育中存在著課程體系不完善
二、學(xué)校在定位和思想認識上有偏差,課堂模式存在問題
1、很多高職學(xué)校在創(chuàng)辦學(xué)校認識方面存在著誤區(qū),認作作為高職教育相比高等教育在社會上的認知度會不高,甚至認為高職教育在很多形式上是低于其他教育的,在政策方面會出現(xiàn)不平等,在高職教育與高等教育之間處理不好相互關(guān)系,影響了培養(yǎng)學(xué)生的過程。高職教育的理念是“將理論與實踐相結(jié)合,培養(yǎng)應(yīng)用型人才,發(fā)展校企合作之路”。然而在現(xiàn)實生活當中,這樣的高職教育理論卻并未的到實質(zhì)性的進行。為什么沒有對高職教育理念進行實質(zhì)性教育,是社會因素、學(xué)生因素,或是學(xué)校教育模式問題,這些需要得到人們的重視。
2、高職教育雖然已有了進步性的發(fā)展,但是在于課堂模式上來說,高職教育的教學(xué)模式還是受于傳統(tǒng)教學(xué)模式的影響,在高職學(xué)校里主要以專業(yè)課為主,專業(yè)課堂上總會出現(xiàn)教學(xué)內(nèi)容規(guī)劃不合理或是教學(xué)內(nèi)容不明確,課堂上主要是“老師講,學(xué)生聽”的模式,師生溝通互動較少,學(xué)生缺乏自主思考,自主創(chuàng)新意識,這樣的教育模式古板單一,嚴重影響教學(xué)質(zhì)量以及對科學(xué)教學(xué)的進行。
三、實踐課程存在落實不到位
1、在高職學(xué)校中實踐教學(xué)占據(jù)著重要地位,雖然實踐教學(xué)已經(jīng)走進了各個高職學(xué)校,但是對于學(xué)生來說實踐基地建設(shè)不完善,學(xué)生實踐機會困難,甚至有的企業(yè)會對實踐的學(xué)生收取相對較高的實踐費用,有的企業(yè)會讓學(xué)生實習,但是企業(yè)會考慮企業(yè)的工作效率,不會讓學(xué)生去勝任主要工作,一般制作一些簡單的衛(wèi)生工作或是做一個旁觀者,這樣的話一場實習下來,學(xué)生們幾乎是學(xué)不到東西的,拿實訓(xùn)教學(xué)就沒有實質(zhì)性的意義,就成為了說說而已。
2、說到實訓(xùn)的目的,我們會聯(lián)想理論知識,高職教育的重要環(huán)節(jié)就是理論與實訓(xùn)教學(xué)的相結(jié)合,然而據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示目前大多數(shù)的實踐活動中所學(xué)理論知識運用的很少,實訓(xùn)課程更是受各方面影響開展不成功,所以說高職教育中存在實訓(xùn)與理論知識相互脫節(jié)的現(xiàn)象。
探究高職教育教學(xué)中存在問題的解決方法
一、加強高職教育教學(xué)的專業(yè)性師資隊伍能力,深入進行高職教育中的新課改
在教學(xué)當中,老師作為學(xué)生各方面的領(lǐng)路人,是促進學(xué)生全方面發(fā)展的監(jiān)督者。高職學(xué)校對任職的專業(yè)老師能力方面的要求需要提高,專業(yè)老師既要對專業(yè)理論知識精通,還需擁有熟練的專業(yè)技能。每學(xué)期制定相應(yīng)的專業(yè)老師培訓(xùn)學(xué)習,加大外聘老師的數(shù)量,使得本院專業(yè)老師得到自我完善。
二、樹立正確的辦學(xué)思想,提高高職教育教材的規(guī)劃
對于高職教育的辦學(xué)思想一定要正確,正確的認識才能使高職學(xué)校的發(fā)展走向正確的道路。不看低學(xué)校的含金量,這樣培養(yǎng)出來的學(xué)生才會信心十足。關(guān)于高職教育教材方面要有清晰的規(guī)劃,明確專業(yè)課中的學(xué)習重點,減少不必要學(xué)習的實際生活中用不到的理論知識,教育教材一定要跟上時代的發(fā)展及時更新,這樣才能夠滿足學(xué)生學(xué)習專業(yè)課的需求。
三、完善實踐課程的實際性開展,重視學(xué)生創(chuàng)新課堂的教學(xué)
實踐課程中實習最為重要,學(xué)校要加大對于實踐基地的建設(shè),加強與企業(yè)的合作,制定合理的實習計劃,為學(xué)生提供可行性實訓(xùn)課堂。任何事物的發(fā)展都在于創(chuàng)新,學(xué)生在學(xué)習方面也需要有創(chuàng)新精神。高職教育開展創(chuàng)新課堂需要做到對教學(xué)模式進行多樣化改變,老師需要建立獨有的創(chuàng)新性教學(xué)方法,最后老師要注重培養(yǎng)學(xué)生對專業(yè)知識所擁有的創(chuàng)新意識的產(chǎn)生。
總之,在目前高職教育的環(huán)境中我們需要注意的不是一個環(huán)節(jié)的問題,而是教學(xué)模式全面發(fā)展的細節(jié)點。
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