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保密制度的意義范文第1篇

【摘要】 【目的】 建立體外誘導骨髓間質干細胞分化的平滑肌細胞模型，探索骨髓間質干細胞分化的平滑肌細胞在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中的作用?！痉椒ā坎捎觅N壁法從SD大鼠骨髓中分離骨髓間質干細胞(BMSC)，運用條件培養(yǎng)基誘導BMSC分化成平滑肌細胞(SMC)，采用免疫熒光法分析骨髓間質干細胞及其分化后的細胞特異性標志物。羥脯氨酸測定法檢測兩種細胞合成細胞外基質能力，粘附和遷移實驗檢測兩種細胞的粘附和遷移能力?！窘Y果】 ①分離的BMSC呈長梭形，呈骨髓間質干細胞表型。經(jīng)條件培養(yǎng)基誘導分化15 d后，誘導分化的細胞形態(tài)呈梭形平滑肌樣。表達平滑肌細胞特異性蛋白標志物α-肌動蛋白(α-SMC)和平滑肌肌球蛋白重鏈1(SM-MHC1)，呈平滑肌細胞表型，命名為骨髓間質干細胞分化的平滑肌細胞(BMSC-SMC)。②羥脯氨酸測定結果顯示，未處理BMSC-SMC合成較高量的膠原，其合成量低于VSMC的合成量，經(jīng)80 mg/L ox-LDL處理72 h后，BMSC-SMC合成膠原的能力顯著降低(P < 0.01)。③細胞粘附實驗結果發(fā)現(xiàn)，未處理BMSC-SMC有中等數(shù)量的細胞發(fā)生粘附，經(jīng)80 mg/L ox-LDL處理1 h后，BMSC-SMC細胞粘附的數(shù)目少量增加，但兩者比較差異無統(tǒng)計學意義(P > 0.05);經(jīng)80 mg/L ox-LDL處理24 h后，BMSC-SMC細胞遷移的數(shù)目顯著增多，與未處理BMSC-SMC比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P < 0.01)?！窘Y論】 ①經(jīng)條件培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)后，骨髓干細胞表達平滑肌特異性標志物，SMα-SMC和SM-MHC1，提示骨髓干細胞能成功分化成平滑肌細胞。②骨髓干細胞誘導成平滑肌細胞后，具有血管平滑肌細胞的一些生物學特征，如增殖能力和分泌胞外基質能力，同時保留了骨髓干細胞的一些生物學特征，如高遷移能力，為其在促動脈粥樣硬化因素作用下，跨內(nèi)皮細胞層和增殖的平滑肌細胞層遷移創(chuàng)造了有利的條件。

【關鍵詞】 氧化型低密度脂蛋白; 骨髓間質干細胞; 誘導分化; 血管平滑肌細胞

Abstract： 【Objective】 To establish the model of smooth muscle cell differentiated from bone mesenchymal stem cell (BMSC-SMC) in vitro and investigate the roles of BMSC-SMC in the occurrence and development of artherosclerosis (As). 【Methods】 BMSC was isolated from the femoral bone of SD rats by adherent method， and VSMC from thoracic aorta. BMSC-SMC was differentiated from BMSC by special condition medium. The specific markers of BMSC and smooth muscle cell differentiated from bone mesenchymal stem cell (BMSC-SMC) were identified by immunofluorescence (IF) staining. After treated with 80 mg/L ox-LDL for 72 h， hydroxyproline assay was performed to detect the extracellular matrix synthesis capacity， and adhesion and migration experiments were used to assay the adhesive and migratory capacity of BMSC-SMC and VSMC. 【Results】 ① The isolated BMSC present a slim-spindle appearance. The cells (BMSC-SMC) induced by condition medium containing b-FGF and TGF-β for 中膜血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)遷移到內(nèi)皮下層并異常增殖或凋亡是動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)形成的重要步驟，近年的研究發(fā)現(xiàn)[1]骨髓干細胞分化而來的平滑肌細胞參與動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展，但骨髓干細胞(bone mesenchymal stem cell， BMSC)分化而來的平滑肌細胞在新生血管內(nèi)膜中究竟是修復血管，還是促進了動脈粥樣硬化的發(fā)生，迄今為止，尚不清楚。本研究在體外誘導骨髓干細胞分化為平滑肌細胞簡稱骨髓間質干細胞分化的平滑肌細胞(smooth muscle cell differentiated from bone mesenchymal stem cell， BMSC-SMC)，并通過羥脯氨酸測定法檢測細胞合成細胞外基質能力，粘附和遷移實驗檢測細胞的粘附和遷移能力，探討B(tài)MSC-SMC在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材 料

胎牛血清、L-DMEM、胰蛋白酶均為美國GIBCO 公司產(chǎn)品;L-谷氨酰胺、油紅O、b-FGF、TGF-β均為美國Sigma 公司產(chǎn)品;羥脯氨酸測定試劑盒購自南京建成生物研究所;其余試劑均為分析純;4 ～ 6周SD大鼠由湖南農(nóng)業(yè)大學動物科技學院實驗動物中心提供，合格證號：scxk(湘)：2003-0003。

1.2 方 法

1.2.1 細胞培養(yǎng)

①大鼠BMSC分離、培養(yǎng)、純化：參照文獻[2，3]方法，取4 ～ 6周SD大鼠體質量100 ～ 120 g，雌雄不限。斷頸處死大鼠，無菌條件下取出股骨、脛骨，并徹底清除附著其上的肌肉組織，去除股骨、脛骨兩端骨髓，顯露骨髓腔，用含有肝素(200 U/mL)的PBS沖出骨髓腔內(nèi)骨髓，1 000 r/min離心6 min，棄去上層脂肪和上清。收集細胞沉淀，使用含150 mL/L胎牛血清的L-DMEM培養(yǎng)液制成均勻的細胞混懸液，按照1 × 105/mL的密度接種至50 cm2培養(yǎng)瓶中，在37 ℃、體積分數(shù)為5% CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)。②大鼠血管平滑肌細胞培養(yǎng)：參照本實驗室方法，SD大鼠，雌雄不限，體質量150 ～ 200 g，4 ～ 6周齡。腹腔麻醉后，無菌操作取出胸主動脈段，置于含PBS液的平皿中漂洗3次，將凝塊洗干凈后剝除外膜的纖維脂肪層，然后縱行切開血管，刮除內(nèi)膜即內(nèi)皮細胞迅速撕下中膜內(nèi)、中層，切成約1 mm寬的小條，浸泡在含血清的PBS液中，并將切好的小組織塊種植于培養(yǎng)瓶壁。置于37 ℃ 恒溫箱，2 h左右，加入含200 mL/L胎牛血清的H-DMEM培養(yǎng)液，待細胞鋪滿瓶底后0.25%胰蛋白酶進行消化傳代，每2 ～ 3 d一次，即大鼠VSMC。

1.2.2 定向誘導BMSC向SMC分化

參照文獻[4]方法將含150 mL/L胎牛血清的H-DMEM中加入堿性成纖維細胞生長因子(b-FGF，2.5 ng/mL)和轉化生長因子(TGF-β，5 ng/mL)，孵育第4代MSC，每2 ～ 3 d一次。誘導15 d，待細胞鋪滿瓶底后，2.5 g/L胰蛋白酶進行消化傳代。

1.2.3 免疫熒光檢測分化平滑肌細胞表明標志物

細胞培養(yǎng)于預先放有無菌蓋玻片的6孔培養(yǎng)板，處理結束后，每種抗原檢測都分為實驗組和對照組。取生長狀況良好的細胞用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗3遍，20 g/L多聚甲醛4 ℃固定15 min，PBS洗3次，每次5 min，0.5% Triton X-100穿透10 min，PBS洗3次，每次5 min。30 mL/L山羊血清室溫下封閉1 h，1：100加入SMα-actin和SM-MHC1小鼠抗大鼠一抗工作液，室溫下孵育1 h，PBS洗3遍，每次5 min，1：500 加入CY3標記二抗，室溫1 h，PBS洗3遍，每次5 min，封片劑封片，熒光顯微鏡下觀察，KAPPAImageBase 圖像系統(tǒng)成像。

1.2.4 氧化低密度脂蛋白的制備

參照文獻[5]的方法制備氧化低密度脂蛋白，正常人血漿低密度脂蛋白(密度1.040 ～ 1.063 mg/mL)采用序列超速離心法制備。將LDL置于PBS溶液中，4 ℃透析36 h，充分去除EDTA后，用含10 μmol/L CuSO4 的PBS溶液(pH7.2)，37 ℃透析20 h，進行氧化修飾。氧化修飾后的LDL(ox-LDL)置含100 μmol/L EDTA 的PBS中，4 ℃透析24 h，終止氧化。超濾除菌，BCA試劑定量蛋白，調(diào)蛋白濃度至1 g/L用于實驗。

1.2.5 膠原含量測定實驗檢測ox-LDL對BMSC-SMC及VSMC細胞膠原合成量的影響

BMSC-SMC及VSMC細胞分別以1.0 × 105個/mL的密度種于6孔板，培養(yǎng)24 h后，再以無血清DMEM培養(yǎng)24 h，換成100 mL/L胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，將細胞分為實驗組和對照組，實驗組分別用80 mg/L ox-LDL處理，對照組H-DMEM培養(yǎng)，培養(yǎng)72 h后，分別以2.5 g/L胰蛋白酶消化細胞，分別收集和處理細胞，具體方法參照羥脯氨酸測定試劑盒，計算羥脯氨酸量。

1.2.6 細胞粘附實驗檢測ox-LDL對BMSC-SMC及VSMC細胞粘附的影響

用無包被的6孔平底培養(yǎng)板和一定濃度的FN包被的6孔平底培養(yǎng)板，4 ℃靜置過夜，用含熱變性的牛血清白蛋白(BSA，1 mg/mL)的Tris緩沖鹽沖洗30 min。胰蛋白酶消化BMSC-SMC及VSMC細胞后，將細胞分為實驗組和對照組，實驗組分別用含80 mg/L ox-LDL的H-DMEM培養(yǎng)液重懸細胞，制成細胞密度為1.0 × 105個/mL的細胞懸液，對照組用H-DMEM培養(yǎng)液重懸細胞，制成細胞密度為1.0 × 105個/mL細胞懸液，每孔接種100 μL的細胞懸液， 37 ℃溫箱內(nèi)靜置1 h，未粘連的細胞可洗去，粘附的細胞用40 g/L的多聚甲醛固定，HE染色，用光學顯微鏡觀察粘附反應，按固定視野記5個高倍視野( × 100)的細胞數(shù)，每次實驗做3孔，取均值。

1.2.7 細胞遷移實驗檢測ox-LDL對BMSC-SMC及VSMC細胞遷移的影響

BMSC-SMC及VSMC細胞用2.5 g/L胰蛋白酶消化平滑肌細胞，分別收集和計數(shù)細胞，制成細胞懸液;將細胞懸液按1.0 × 105個/mL的密度種于6孔板中。再加入含100 mL/L胎牛血清的DMEM，放入37 ℃和體積分數(shù)5% CO2的孵箱中靜置培養(yǎng)48 h，換用無血清的DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h，使細胞同步化，去上清培養(yǎng)液，無菌PBS洗滌3次，用200 μL的無菌Tip頭沿6孔板中央迅速畫一直線，用PBS清洗3次，將孔分為實驗組和對照組，實驗組用含80 mg/L ox-LDL的H-DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞，對照組用H-DMEM培養(yǎng)液細胞，37 ℃溫箱內(nèi)靜置24 h，每組重復3次;分別于24 h后取出，相差顯微鏡下觀察，拍照。

1.3 統(tǒng)計學處理

實驗所得數(shù)據(jù)采用x ± s表示，用SPSS13.0進行統(tǒng)計處理，采用兩組間t檢驗比較，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 骨髓間質干細胞源性SMC和血管SMC表型鑒定

用免疫熒光法檢測VSMC早、晚期標志物SMα-actin和SM-MHC1[6]。結果表明，誘導的BMSC-SMC表達VSMC的早、晚期標志物SMα-actin和SM-MHC1，在胞漿內(nèi)呈絲狀，細胞骨架樣分布，呈平滑肌細胞表型(圖1 B、D)。其表達情況與VSMC相似(圖1 A、C)。

2.2 骨髓間質干細胞源性SMC和血管SMC細胞合成細胞外基質能力

利用羥脯氨酸測定試劑盒，檢測細胞合成膠原的含量，其原理是，羥脯氨酸在膠原蛋白中占13.4%，在彈性蛋白中占極少量，其它蛋白中均不存在。羥脯氨酸在氧化劑的作用下所產(chǎn)生的氧化產(chǎn)物與二甲氨基苯甲醛作用呈現(xiàn)紫紅色，根據(jù)其呈現(xiàn)的深淺可推算出其含量。檢測結果顯示，未處理BMSC-SMC合成較高量的膠原，而其合成量低于VSMC的合成量，經(jīng)80 mg/L ox-LDL處理72 h后，BMSC-SMC合成膠原的能力顯著降低(P < 0.01)，相同處理VSMC合成膠原的能力亦降低(P < 0.05，圖2)。

2.3 骨髓間質干細胞源性SMC和血管SMC細胞粘附能力

細胞粘附實驗結果發(fā)現(xiàn)，細胞培養(yǎng)1 h后，未處理BMSC-SMC有中等數(shù)量的細胞發(fā)生粘附(圖3C)，經(jīng)80 mg/L ox-LDL處理1 h后，BMSC-SMC細胞粘附的數(shù)目少量增加(圖3D)，但兩者比較無顯著性差異(P > 0.05)。同時未處理VSMC亦有中等數(shù)量的細胞發(fā)生粘附(圖3A)，經(jīng)80 mg/L ox-LDL處理1 h后，細胞粘附的數(shù)目有所減少(圖3B)，但兩者比較無顯著性差異(P > 0.05)。

2.4 骨髓間質干細胞源性SMC和血管SMC細胞遷移能力

細胞損傷-修復實驗是經(jīng)典的檢測細胞遷移能力的實驗，檢測發(fā)現(xiàn)，損傷細胞24 h后，未處理BMSC-SMC有中等數(shù)量的細胞發(fā)生遷移，少量細胞遷移至劃痕的中線，經(jīng)80 mg/L ox-LDL處理24 h后，BMSC-SMC細胞遷移的數(shù)目顯著增多，許多細胞遷移至的劃痕的中線對面，與未處理BMSC-SMC比較，具有顯著性差異(P < 0.01，圖4B和D)，相同處理VSMC的細胞數(shù)目和距離亦增強(P < 0.05，圖4F和H)，但增強幅度較BMSC-SMC小[7]。

3 討 論

ox-LDL由低密度脂蛋白(LDL)在體內(nèi)氧化形成，它是AS發(fā)生、發(fā)展乃至不穩(wěn)定斑塊形成的關鍵因子[8]，其在AS中的病理作用已公認[9-10]。目前在體外研究中用的低密度脂蛋白大多是用超速離心法制備，所制備的LDL要求4 ℃避光保存，保存時間不超過3周，天然的低密度脂蛋白經(jīng)氧化修飾形成的脂蛋白，稱為ox-LDL，用過度金屬離子Cu2+、Fe2+等，在體外適宜條件下與LDL孵育一段時間后，能使LDL發(fā)生氧化變構，成為ox-LDL[11]。

VSMC從血管的中層向內(nèi)膜下遷移，并以自分泌、旁分泌的形式分泌大量的細胞外基質、生長因子、細胞因子和血管活性物質在高血壓、動脈粥樣硬化、冠脈搭橋術及血管成形術后再狹窄等多種血管損傷性疾病的形成過程中起著重要的作用[12-13]。而細胞-細胞之間以及細胞-細胞外基質之間的正常粘附是細胞生長、分化、遷移以及損傷修復的基礎，并負責細胞內(nèi)外信號的傳遞，也是心血管系統(tǒng)所有組成成分維持正常功能的前提條件，粘附功能的異常在心血管疾病發(fā)病機制中也起著關鍵的作用[14]。VSMC的增殖和遷移以及細胞外基質的重構在AS的發(fā)生發(fā)展中起重要作用[15-17]。VSMC 從動脈血管中層到血管內(nèi)皮層的遷移，使血管功能異常。VSMC從內(nèi)膜基底層移行入內(nèi)膜層，導致內(nèi)膜增厚，形成纖維帽，最終形成動脈粥樣硬化斑塊[18]。然后局部炎癥環(huán)境可以引起膠原酶的表達，抑制蛋白水解酶抑制劑的表達，從而使纖維帽變得薄弱易于破裂，進而引發(fā)血栓的形成，VSMC增生、遷移的程度決定了預后。

BMSC能進行自我更新，能夠分化成脂肪細胞、骨細胞、軟骨細胞和肌細胞等不同的細胞[19-21]。局部的環(huán)境和細胞群體決定了其分化方向[22]，在體外TGF-β可誘導BMSC分化為VSMC[6]。2002年，Sata[1]提出血液干細胞分化而來的平滑肌細胞參與動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。

在本研究中我們對BMSC-SMC和VSMC合成細胞外基質能力、粘附能力以及遷移能力進行分析，結果顯示，經(jīng)ox-LDL處理后，BMSC-SMC及VSMC合成膠原的能力都顯著降低;但細胞粘附能力均無差別; BMSC-SMC及VSMC細胞遷移的數(shù)目均顯著增多，并且BMSC-SMC的增強幅度更大。上述結果提示，在ox-LDL的作用下，BMSC-SMC合成膠原能力的下降，可能與其遷移能力有關，但與其粘附能力無關，說明BMSC細胞在向VSMC細胞分化的過程中，出現(xiàn)了一些與VSMC具有相似性細胞生物學特征，同時保留了其BMSC細胞的一些特征。而且BMSC-SMC的遷移能力較VSMC強，為其在促動脈粥樣硬化因素作用下，跨內(nèi)皮細胞層和增殖的平滑肌細胞層遷移創(chuàng)造了有利的條件。

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保密制度的意義范文第2篇

關鍵詞：荷葉水提物；氧化低密度脂蛋白；單核細胞趨化蛋白1；血管細胞黏附分子1

中圖分類號：R285 文獻標識碼：A 文章編號：1673-7717（2011）04-0799-04

Water Extract of The Lotus Leaf Suppressed Expression of Monocyte Chemoattractant

Protein-1（MCP-1） and Vascular Cell Adhesion Molecule 1（VCAM-1） Induced By

Oxidized Low Density Lipoprotein （Ox-LDL） in Human Umbilical Vein Endothelial Cells

ZHANG She-bing, XU Xin, MA Shao-chun, TANG Liang-qiu, JIANG Zhi-ping，F(xiàn)AN Wen-mao,

CHEN Jin-feng，CHANG Guan-nan, YANG Li-jun

（Department of Cardiology, Yuebei People's Hospital, Shaoguan 512026，Guangdong，China）

收稿日期：2010-11-25

基金項目：廣東省“建設中醫(yī)藥強省”科研立項（2009066）；韶關市科技信息局資助項目［韶科（衛(wèi)）2009-01］

作者簡介：張社兵（1971-），男，湖南郴州人，副主任醫(yī)師，醫(yī)學博士，研究方向：冠心病心律失常。

通訊作者：徐新（1956-），男，江蘇無錫人，教授，碩士研究生導師，碩士，研究方向：動脈粥樣硬化。

Abstract:Objective:To investigate the expressions of monocyte chemoattractant protein-1（MCP-1） and vascular cell adhesion molecule 1（VCAM-1） induced by oxidized low-density lipoprotein（Ox-LDL） in human umbilical vein endothelial cells（HUVECs） suppressed by water extract of the lotus leaf.Methods:HUVECs were cultured and treated with Ox-LDL of 3 different concentrations （25 microg/L, 50 microg/L, and 100 microg/L） for 24 hours. We determined mRNA expressions of MCP-1 and VCAM-1 by semi-quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction （RT-PCR） .Concentration of MCP-1 and VCAM-1 protein in medium was measured using the enzyme linked-immuno-sorbent assay （ELISA） method. Pretreated HUVECs with water extract of the lotus leaf 24 hours before adding Ox-LDL ,then cells were treated with Ox-LDL（50 microg/L） for 24 hours. mRNA expressions of MCP-1 and VCAM-1 were determined by semi-quantitative RT-PCR. Concentration of MCP-1 and VCAM-1 protein in medium was measured using the ELISA method.Results：Exposure of HUVECs to Ox-LDL （25 microg /L，50 microg /L and 100 microg /L respectively） resulted in upregulation of MCP-1 and VCAM-1,both mRNA and protein expressions, in a dose-dependent manner. Expressions of MCP-1 and VCAM-1 induced by Ox-LDL（50 microg /L） were significantly suppressed by water extract of the lotus leaf in a dose-dependent manner. Conclusions:our results suggest that Ox-LDL can induce expressions of MCP-1 and VCAM-1 in a dose-dependent manner in HUVECs, and this process can be suppressed by water extract of the lotus leaf.

Key words:water extract of the lotus leaf；oxidized low-density lipoprotein；monocyte chemoattractant protein-1；vascular cell adhesion molecule 1

氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，Ox-LDL）是動脈粥樣硬化最明確的危險因子之一，Ox-LDL可能通過誘導內(nèi)皮細胞表達黏附分子和趨化因子，募集單核細胞向血管內(nèi)皮黏附，從而在動脈粥樣硬化的發(fā)生中起重要作用。荷葉為睡蓮科植物蓮的葉，又名藕葉，種植于我國南方大部分省份，荷葉藥、食兩用，既往研究表明，荷葉中的生物活性物質具有降脂、減肥、降血壓等多種作用【sup】［1-4］【/sup】。本研究旨在探討荷葉水提物能否抑制Ox-LDL誘導的血管內(nèi)皮細胞表達趨化因子和黏附分子。

1 材料與方法

荷葉水提物（由湘南學院關章順教授提供），提取方法按文獻【sup】［11］【/sup】，人臍靜脈內(nèi)皮細胞［ATCC, USA.（CRL-1730）］，新生小牛血清（中南大學湘雅中心實驗室），RPMI 1640培養(yǎng)基（GIBCO），Ox-LDL（北京協(xié)和三友公司），Trizol（Molecular Research Center, Inc），RevertAid【sup】TM【/sup】 First strand Cdna Synthesis Kit（Fermentas），臺盼藍染色細胞存活率檢測試劑盒（江蘇碧云天生物技術研究所），TaKaRa Taq【sup】TM【/sup】 Hot start version［寶生物工程（大連）有限公司］，DNA Ladder Marker［寶生物工程（大連）有限公司］，引物設計與合成（北京奧科生物技術有限責任公司），MCP-1和VCAM-I ELISA試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）

1.1 人臍靜脈內(nèi)皮細胞的培養(yǎng) 人臍靜脈內(nèi)皮細胞株（human umbilical vascular endothelial cells，HUVECs）用含10%小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)基（含10mmol/L的HEPES，2mmol/L谷氨酰胺，1.5g/L碳酸氫鈉，10%小牛血清），37℃、5%CO【sub】2【/sub】培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天換液，生長至85%融合時接種于6孔板，接種密度為1×10【sup】6【/sup】/孔。臺盼藍染色檢測細胞活力大于90%。待細胞貼壁生長占孔板底面積約50%滿后，隨機分組用于實驗，每組重復3孔。

1.2 Ox-LDL刺激和藥物干預實驗 Ox-LDL刺激組為細胞中分別加入25mg/L、50mg/L、100mg/L的Ox-LDL，共同孵育24h，藥物干預組則分別在細胞中加入10mg/L、20mg/L、40mg/L的荷葉水提物（用含DMSO的無血清培養(yǎng)基配制，DMSO含量＜1‰）共同孵育24h，去上清，分別再加50mg/L的Ox-LDL刺激24h，收集細胞用于提取總RNA，空白對照組細胞中除不加Ox-LDL和藥物外其余條件同刺激組。

1.3 半定量RT-PCR方法檢測細胞的單核細胞趨化蛋白1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）和血管細胞黏附分子1（vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1）的mRNA的表達：收集細胞，用Trizol提取細胞總RNA，經(jīng)紫外分光光度儀（Beckman DU-640）測定OD 260/280比值在1.8-2.0，半定量RT-PCR檢測MCP-1和VCAM-1的mRNA表達，RT-PCR操作按試劑盒說明書進行。RT反應條件：70℃ 5min，25℃ 5min，25℃ 10min，42℃ 60min，70℃ 10min。人MCP-1引物：上游引物5’-CAT AGC AGC CAC CTT CAT TCC-3’，下游引物：5’-GAG TTT GGG TTT GCT TGT CCA-3’，PCR擴增片段長254 bp。人VCAM-1引物序列：上游：5’-TCT ACG CTG ACA ATG AAT CC-3’，下游：5’-ACT TGA CTG TGA TCG GCT TC-3’，擴增長度178bp；GAPDH引物序列：上游：5’-TCGGAGTCAACGGATTTGGTCGTA-3’，下游：5’-ATGGACTGTGGTCATGAGTCCTTC-3’，擴增長度521bp。引物由北京奧科生物技術有限責任公司合成。MCP-1反應條件：94℃變性30秒、55℃退火30秒、72℃延伸60秒，30個循環(huán)；最后72℃延伸7min。VCAM-1反應條件：94℃ 5min,（94℃ 40s，59℃ 40s，72℃ 40s）30個循環(huán)，然后72℃ 5min。PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳，以MCP-1和VCAM-1擴增條帶的吸光度值（A value）與GAPDH條帶的吸光度之比作為MCP-1和VCAM-1 mRNA的表達量。

1.4 酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay，ELISA）測定細胞上清MCP-1和VCAM-1含量 采用酶聯(lián)免疫吸附法測定細胞上清中MCP-1和VCAM-1的蛋白水平，檢測靈敏度為15.6-1000pg/mL,操作步驟嚴格按照試劑盒及酶標儀的說明書進行。批內(nèi)批間變異系數(shù)均控制

1.5 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析，多個樣本均數(shù)比較用One-Way ANOVA，兩兩比較用LSD法，P

2 結 果

2.1 不同濃度Ox-LDL刺激后HUVECs的MCP-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表達及細胞上清MCP-1和VCAM-1含量變化

如圖1、2、3所示，分別用25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L的Ox-LDL刺激HUVECs后，MCP-1和VCAM-1 mRNA的表達及細胞上清中的含量呈濃度依賴性上調(diào)（P

2.2 荷葉水提物干預后MCP-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表達及細胞上清MCP-1和VCAM-1含量變化

如圖4、5、6示，荷葉水提物干預后，HUVECs的MCP-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表達及細胞上清MCP-1和VCAM-1含量呈濃度依賴性下降。

3 討 論

在動脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS）的發(fā)生發(fā)展過程中，循環(huán)單核細胞趨化、聚集、黏附到血管內(nèi)皮是AS的最早期事件，其繼而浸入到血管內(nèi)皮下，參與血管壁的炎癥反應和泡沫細胞的形成【sup】［5］【/sup】。由血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生的趨化因子和黏附分子在介導循環(huán)單核細胞趨化、聚集、黏附到血管內(nèi)皮的過程中起了至關重要的作用。既往研究表明MCP-1和VCAM-I參與了動脈粥樣硬化形成，其作用在于趨化單核細胞向內(nèi)皮募集，促進清道夫受體的表達，誘導血管平滑肌細胞的增殖和移動等【sup】［6-8］【/sup】。

保密制度的意義范文第3篇

一、加強領導，深入學習領會

及時召開全局干部職工大會對新修訂的《保密法》進行學習，深刻了解保密法修訂的時代背景、主要思路和重要意義，特別是對新修訂的部分進行了全面、系統(tǒng)的剖析和闡述。要求局機關各科室、各直屬單位根據(jù)自身特點，有針對性學習和運用保密法相關知識，全局干部職工保密法制觀念、意識得到極大的增強。

進一步完善局保密工作領導小組，領導組下設辦公室，負責保密工作的日常事務。領導小組定期不定期對全局的保密工作進行檢查、督促和指導，確保各項保密工作措施得到較好落實，保密工作做到事事有人管，件件有人抓，責任具體，任務明確，措施得力。

二、健全完善保密管理工作制度

在抓好保密法制宣傳教育的基礎上，進一步健全完善干部、保密要害部門部位工作人員崗位職責，進一步規(guī)范會議保密制度、文件管理制度、電子傳輸保密制度等，建立并形成機關事務保密安全管理工作科學化、規(guī)范化、制度化的長效機制。

三、加強教育，強化意識，促進檢查

為切實做好保密工作重要性的宣傳教育，局機關在局辦公會議上宣傳保密知識和保密案例、在局務會上傳達學習有關保密工作要求，還為局機關、各直屬單位發(fā)放《保密手冊》。

保密制度的意義范文第4篇

關鍵詞　競爭情報　競爭情報系統(tǒng)　CIO管理　反情報活動

競爭是現(xiàn)代市場經(jīng)濟的本質表現(xiàn)，市場經(jīng)濟條件下，企業(yè)競爭日益激烈，企業(yè)競爭是經(jīng)濟競爭的主流，現(xiàn)代企業(yè)的成長離不開競爭情報，企業(yè)要在競爭上取得優(yōu)勢，就必須明確認識和發(fā)揮競爭情報對企業(yè)的作用。企業(yè)只有依靠競爭情報才能不斷更新企業(yè)面貌，提高企業(yè)經(jīng)濟效益，增強企業(yè)競爭能力，才能更好地滿足社會的需求，適應社會經(jīng)濟的發(fā)展和激烈競爭的要求。

1　競爭情報的整體作用競爭情報（Competitive Intelligence）具有企業(yè)決策的智囊作用，市場導向的尖兵作用，商品營銷的警示作用，技術交流協(xié)作的參謀作用，市場投資經(jīng)濟價值的揭示作用，是現(xiàn)代企業(yè)生存的重要基礎和戰(zhàn)略武器。競爭情報的基本作用就是增強世界的有序性，對現(xiàn)代企業(yè)來講，競爭情報是企業(yè)生產(chǎn)經(jīng)營有序的保證、管理有序的基礎、決策有序的依據(jù)、控制有序的靈魂。競爭情報比一般的經(jīng)濟情報更加具有目的性、時效性、實用性。首先，它是企業(yè)感知外部環(huán)境變化的預警系統(tǒng)，能幫助企業(yè)及時洞悉政治的、經(jīng)濟的、社會的、市場的變化以及這些變化對企業(yè)可能構成的威脅和機遇。其次，它是企業(yè)為適應未知環(huán)境變化而作出戰(zhàn)略決策和競爭策略的支持系統(tǒng)，為企業(yè)的競爭決策提供依據(jù)和論證。第三，它是現(xiàn)代企業(yè)經(jīng)營管理的智囊團和思想庫，是企業(yè)領導集團的重要參謀。

2　競爭情報系統(tǒng)的管理工作競爭情報系統(tǒng)的管理工作包括對情報的管理和情報人員的管理工作。要使競爭情報系統(tǒng)最有效的為企業(yè)發(fā)揮作用，必須是收集、分析、服務反饋、管理決策各環(huán)節(jié)緊密配合。對競爭情報的管理是從情報的收集、分析研究、利用與決策開始。競爭情報收集人員通過各種渠道收集到情報后，立即傳送給研究部門進行分析，做到情報的進一步精化，由表及里、由此及彼、去粗取精、去偽存真，提煉出高價值、智能化的情報，供決策層及相關部門應用，讓其在最短的時間內(nèi)作出好的戰(zhàn)略決策，以此來贏得市場與競爭。尤其是對競爭對手的企業(yè)實力、未來目標、現(xiàn)行戰(zhàn)略進行仔細分析，了解本企業(yè)在市場中的地位，作出搶占市場前的準備。通過分析后的情報是智能性、增值性的產(chǎn)品，它由CIO（Chief Information Officer：信息經(jīng)理）反饋給各部門主管及決策層，從而采取及時有效的措施，贏得競爭，企業(yè)的競爭情報系統(tǒng)才算發(fā)揮了作用。

當今有很多企業(yè)是建而不用。所謂“建而不用”即跟著風潮建立相應的競爭情報系統(tǒng)，卻不會去應用它，這是企業(yè)的重大失誤。這不僅是企業(yè)人員與資金的浪費，也使企業(yè)失去很多良好的機遇，企業(yè)也因此可能走向衰落。

人是關鍵性因素。對情報人員的管理尤為重要。首先要保證其素質與技術水平，情報人員要學會如何快速、廣泛地收集情報，無論是從書籍、報刊、產(chǎn)品目錄等收集，還是從第三方獲得情報，都需有細致、全面、認真的態(tài)度，還要保證了解計算機現(xiàn)代技術，擁有很好的人際圈子，爭分奪秒的意識，做到以上這些，才能收集到情報。情報人員還需對情報有分析研究的能力，要有一定的邏輯思維與市場分析能力，善于抓住事物的本質，做好系統(tǒng)分析，形成規(guī)范化、條理化的情報送交CIO，再由CIO發(fā)送給決策部門處理利用。情報人員還需要有很強的保密意識，對情報系統(tǒng)的任何資料都需妥善保管，以免被其他公司竊取利用，對本公司造成不利和損失。設想如果情報人員都不能做到“不該說的一句都不說”，那么，公司的競爭情報系統(tǒng)必定是個失敗的部門，也就沒有任何存在的意義。

CIO的素質是情報系統(tǒng)的決定性因素。首先，CIO要有領導藝術，如果他在系統(tǒng)中能有高超的領導才能，獨特的領導藝術魅力，這個系統(tǒng)就有了好的首領。CIO必須是一個卓越的管理專家。對企業(yè)綜合、復雜的情報系統(tǒng)進行全面有效的管理、開發(fā)和利用，建立多方位多功能的情報體系，最大限度地實現(xiàn)情報資源的共享，以輔助公司高層決策和長遠規(guī)劃。CIO還必須有戰(zhàn)略遠見。CIO能否及時獲取和處理與本公司經(jīng)營活動有關的最新情報，幫助公司確立新的戰(zhàn)略方向和經(jīng)營策略往往就成為企業(yè)能否立于不敗之地的關鍵所在。協(xié)調(diào)能力也是必不可少的。CIO一方面直接對最高決策者CEO（Chief Enterprise Officer）負責，另一方面還要全面統(tǒng)籌調(diào)控情報系統(tǒng)各分支機構和部門。商業(yè)經(jīng)營頭腦是CIO的基礎。有著管理IS和公司商業(yè)部門的雙重經(jīng)驗，擁有卓越的領導才能和靈活的商業(yè)經(jīng)營頭腦的高級復合型人才，他們通過對財務報表、管理報告和用戶信息數(shù)據(jù)的分析和集成，開發(fā)出具有新活力的信息，并直接應用到企業(yè)的經(jīng)營決策中，從而極大地加快了企業(yè)在市場競爭中的反應能力。所以在建立企業(yè)競爭情報系統(tǒng)之前，選擇優(yōu)秀的CIO是首要管理工作。企業(yè)董事會還應時刻監(jiān)督管理CIO的工作，保證了CIO的工作，情報工作即做對了一半。

另外，企業(yè)還應對情報人員也實行相應的獎懲措施。其收集到的情報如果給企業(yè)創(chuàng)造了時機與效益，就應給予獎勵，這樣才能激勵情報人員的工作積極性。相反，若企業(yè)因為未得到情報而失去了機會，則應進行教育與懲罰。情報系統(tǒng)應該成為一個非常有活力的系統(tǒng)。這樣才算管理好了。

3　企業(yè)反情報活動企業(yè)除了研究分析競爭對手情報、競爭環(huán)境情報、競爭策略情報、競爭目標情報以外，還需對本企業(yè)的情報進行自我保護，可采取以下措施：

（1）建立內(nèi)部人員情報保密制度。

（2）提高全員保密意識，簽定保密協(xié)議。

（3）建立內(nèi)部技術保密制度。

（4）建立經(jīng)濟部門保密制度。

（5）建立宣傳保密制度。在產(chǎn)品文獻、產(chǎn)品展覽會、產(chǎn)品鑒定會、訂貨會、交易會等宣傳過程中，注意保密。

（6）建立廢品處理制度。

（7）建立產(chǎn)品保密制度與有形載體保密制度。

企業(yè)要生存，必須獲取競爭性情報?，F(xiàn)代企業(yè)注重情報信息工作，建立起好的信息工作模式，通過企業(yè)內(nèi)部信息機構和外部信息源、信息咨詢機構獲取競爭性情報，并對其收集的關于競爭對手、競爭環(huán)境、競爭策略的情報進行深層次的研究，同時企業(yè)必須對競爭情報系統(tǒng)進行良好的管理。管理是關鍵，只有建立了嚴格、有序、良好的管理系統(tǒng)，才能使企業(yè)步入完善的發(fā)展軌道，而且CIO要有一定的素質，并作好反情報工作。只有這樣，才能使企業(yè)在競爭中領先一步，蒸蒸日上。

1　曹建勛，張曼。 關于發(fā)展企業(yè)競爭情報業(yè)務的思考。 管理信息系統(tǒng)，1995（1）

2　邸德海。 現(xiàn)代信息技術對企業(yè)組織的影響及其對策。 管理信息系統(tǒng)，1997（4）

3　烏家培，秦海清。 競爭信息和企業(yè)戰(zhàn)略。 中國工業(yè)經(jīng)濟，1995（12）

4　俞曉軍。 信息革命與企業(yè)組織變革。 中國工業(yè)經(jīng)濟，1996（6）

保密制度的意義范文第5篇

關鍵詞： 軍隊院校 保密工作 創(chuàng)新發(fā)展

總書記在黨的十七大報告中提出的科學發(fā)展觀，內(nèi)容豐富、內(nèi)涵深刻、論述精辟，是中國化的最新成果，是我國經(jīng)濟社會發(fā)展的重要指導方針，也是部隊院校保密工作發(fā)展的行動指南。全面深入學習領會和貫徹落實科學發(fā)展觀，對做好當前和今后一個時期的保密工作意義重大。我對如何深入學習貫徹落實科學發(fā)展觀推進軍隊院校保密工作創(chuàng)新發(fā)展談談體會。

一、推進院校保密工作發(fā)展必須堅持以思想理念創(chuàng)新為先導

隨著全球經(jīng)濟、信息科技發(fā)展，特別是我國改革開放及市場經(jīng)濟向縱深推進，保密工作遇到了許多新情況、新問題、新特點。要適應新變化，迎接新挑戰(zhàn)，保密工作必須堅持科學發(fā)展，以思想理念的創(chuàng)新發(fā)展為先導，這是保密工作發(fā)展的重要前提和基礎。所謂思想理念上的創(chuàng)新發(fā)展，就是要與時俱進，解放思想，突破傳統(tǒng)陳舊的、單一封閉的保密觀，確立全方位、多元化、高科技和開拓性的保密思想。實現(xiàn)這一新的思想觀念，當前必須克服“三種偏見”，即“無密可保”、“有密難?！焙汀氨Ｃ苡绊懝ぷ鳌钡乃枷?。應樹立三個觀念：一是越是改革開放，越要加強保密工作的觀念；二是保密就是“保安全，保發(fā)展”的觀念；三是善于把握新特點、新規(guī)律、破解新問題的觀念。只有堅持思想理念上的創(chuàng)新發(fā)展，把先進保密思想灌注到每個學員的頭腦中，才能催生保密強勢動力源。

二、強化院校保密工作必須堅持把做人的工作置于首位

科學發(fā)展觀的核心是以人為本。在保密領域的發(fā)展，具體到工作管理，就是要以人為重點目標。人既是保密工作管理者，又是保密工作管理對象。人是做好保密工作的基礎，做好保密工作是事在人為。尤其對特定群體，更是管理目標的重中之重。當前應著力從三個方面抓好：第一，抓人員。抓準這個重點，準確確定要害部門的人員，明確崗位責任和要求，監(jiān)督其履行職責到位。第二，抓教育培訓。部隊保密委員會要充分發(fā)揮本級機構職能作用，重點抓好人員的保密教育培訓，要做到教育培訓計劃、時間、人員“三落實”。通過抓教育培訓，全面提高人員的政治思想和業(yè)務素質，增強保密工作的服務意識、責任意識和憂患意識。同時，也要努力做到“三個到位”。一是講到位。要堅持不懈地對各級領導干部和學員進行經(jīng)常性的保密教育和保密提醒，講形勢、講責任、講危害，把保密工作的重要性講深，把保密工作面臨的嚴峻形勢講透，把有關人員的保密責任講清，把泄密的危害和后果講清楚。二是做到位。要把各項關于加強保密工作的各項方針政策和措施落到實處，特別是機構人員要到位，技術裝備配備要到位，經(jīng)費保障要到位。三是查到位。要善于運用保密督查手段特別是技術檢查等硬手段，及早發(fā)現(xiàn)問題，及時糾正問題，采取切實有效的措施堵塞漏洞，消除隱患。

三、抓好院校保密工作重點必須堅持以制度變革發(fā)展為主體

新時期、新形勢保密工作，最突出的特點是信息技術高度發(fā)展和日新月異，這些使得保密工作的技術性成分進一步突出。與過去保密工作相比較，在保密制度內(nèi)容、注意的重點和采取的措施等各個方面無不體現(xiàn)時代的明顯特征。因此，必須針對當今時代保密工作的特點，加大保密制度變革的力度，使它適應滿足信息化條件下保密工作的需求。在保密制度建設上，一是要建立健全教育培訓制度建設?，F(xiàn)階段，信息技術幾乎涉及我們工作和生活的方方面面，不知不覺就可能泄密，給個人、單位，甚至院校、國家造成不可彌補的損失和安全穩(wěn)定方面的嚴重后果。因此，必須建立對所有人員進行相關教育培訓的制度，使每一個人在從事工作之前，能夠詳盡地了解和掌握相關的保密知識和措施，做到有備無患。二是要加強管控制度的改革創(chuàng)新。對計算機網(wǎng)絡等信息技術的管控，必須適應它特點的技術管控手段和措施，以技術管技術，以技術控制技術，一系列管控制度要切實起到應有的作用。三是建立健全有關責任和處罰制度。必須讓每一個人都明確自己的責任，尤其是出現(xiàn)問題以后所承擔的責任，時時敲響警鐘，繃緊保密工作這根弦，消除任何僥幸和麻痹思想，引以為戒。