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維生素k3

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維生素k3范文第1篇

目的 觀察臨床應(yīng)用維生素k3于雙側(cè)足三里穴位注射治療急性腹痛的療效。方法 選擇各種急性腹痛患者150例,隨機(jī)分為兩組,治療組86例,采用維生素K3于雙側(cè)足三里穴位注射治療,對(duì)照組64例,給予患者臀部6542針10 mg肌注解痙止痛,比較兩組的止痛效果。結(jié)果 治療組總有效率為89.5%,對(duì)照組總有效率為75.0%,兩組總有效率比較有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論 維生素K3穴位注射治療急性腹痛療效顯著。

【關(guān)鍵詞】 維生素K3 穴位注射 急性腹痛

腹痛是常見的臨床癥狀,也是促使病人就診的主要原因之一,近年來(lái)筆者在臨床常用維生素K3于雙側(cè)足三里穴位注射治療急性腹痛,并取得較為滿意的效果,現(xiàn)將觀察情況報(bào)道如下。

資料與方法

1.一般資料

于2006年1月至2008年7月門診及住院病人中選擇急性腹痛150例,男性98例,女性52例;年齡8~79歲,其中急性胃腸炎84例、急性膽囊炎11例、膽結(jié)石7例、泌尿系統(tǒng)結(jié)石15例、痛經(jīng)11例、胃癌疼痛3例、急性闌尾炎19例,疼痛20 min~24 h就診。全部符合《臨床疾病診斷依據(jù)治愈好轉(zhuǎn)標(biāo)準(zhǔn)》(第2版)[1]的診斷標(biāo)準(zhǔn)。急性腹痛指疼痛持續(xù)時(shí)間<24 h[2]。

2.治療方法

隨機(jī)分為兩組,治療組86例,對(duì)照組64例。治療組:首先向患者及其家屬做好解釋工作,使其對(duì)穴位注射有所了解,消除他們的顧慮,增強(qiáng)患者的信心,以取得很好的配合,囑患者取仰臥位或坐位,雙下肢自然伸直,放松雙下肢肌肉,足三里穴局部消毒,用5 ml針管,6號(hào)針頭抽取注射用維生索K3(亞硫酸氫鈉甲萘醌,江蘇漣水制藥有限公司,批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字H32023939),成人每次8 mg,兒童每次4 mg,注射以針頭與皮膚呈垂直方向刺入足三里穴位,進(jìn)針1.0~2.0 cm,令進(jìn)針部位產(chǎn)生酸脹等感覺(jué)[3],稍許回抽,確認(rèn)無(wú)回血,即將維生素K3注入足三里穴內(nèi)。術(shù)畢,以消毒棉球按壓穴位1~5 min左右即可。一般注射5~10 min起效,作用可維持2~5 h[4]。所有患者均未再使用其他解痙或止痛藥物。一次給藥10~60 min,并于12 h后隨訪。對(duì)照組:給予患者6542針10 mg臀部肌注解痙止痛。

3.療效判定標(biāo)準(zhǔn)

參照《臨床疾病診斷依據(jù)治愈好轉(zhuǎn)標(biāo)準(zhǔn)》判斷療效。對(duì)使用維生素K3或6542后1 h內(nèi)腹痛緩解程度進(jìn)行判定。腹痛明顯改善能忍受開始記時(shí),腹痛消失后再記時(shí),治療后疼痛30 min內(nèi)緩解為顯效;治療后疼痛1 h內(nèi)緩解為有效;治療后疼痛無(wú)減輕為無(wú)效;總有效率等于顯效加有效。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(-±s)表示,采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料以χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有顯著性意義。

結(jié) 果

1.兩組療效與顯效時(shí)間比較

治療組總有效率為89.5%,對(duì)照組總有效率為75.0%,兩組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.581,P<0.05)。見表1。治療組顯效時(shí)間少于對(duì)照組,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.975,P<0.01),治療組疼痛消失時(shí)間少于對(duì)照組,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.538,P<0.05)。見表2。表1 兩組療效比較(略)注:兩組療效比較,χ2=5.581,P<0.05,有顯著差異。表2 兩組疼痛緩解時(shí)間統(tǒng)計(jì)(略)

2.治療反應(yīng)及不良反應(yīng)

治療組雙側(cè)足三里穴位注射維生素K3可使注射點(diǎn)迅速產(chǎn)生酸、脹感,隨之迅速減輕、消失,同時(shí)腹痛亦隨之減輕或消失,未發(fā)現(xiàn)有其他不良反應(yīng)。對(duì)照組臀部注射6542后少數(shù)患者訴有口干、臉紅、頭暈、視物欠清、排尿困難,余未見其他不良反應(yīng)。

討 論

臨床上治療腹痛最常選用抗膽堿能藥物如阿托品、6542等解痙止痛,但這些藥物在緩解疼痛的同時(shí),其毒副作用相對(duì)較多,也較常見,如有口干、心動(dòng)過(guò)速、皮膚潮紅、眩暈、瞳孔擴(kuò)大、尿滯留、興奮、煩躁、譫語(yǔ)、驚厥、眼內(nèi)壓升高等[5],禁用于青光眼、前列腺肥大患者。為避免上述藥物的毒副作用發(fā)生,同時(shí)又能很好地為患者解除疼痛這一臨床癥狀,尤其是對(duì)于小兒及老年患者,近年來(lái)維生索K3(亞硫酸氯鈉甲萘醌)日漸受到臨床工作者的親睞。

維生素K3(亞硫酸氯鈉甲萘醌)可以用于鎮(zhèn)痛,主要用于:①腹部痙攣性疼痛,作用機(jī)制是維生素K3有選擇性直接松弛平滑肌,同時(shí)對(duì)乙酰膽堿引起的平滑肌收縮有明顯的抑制作用,并有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛作用,其鎮(zhèn)痛作用機(jī)制與阿片受體和內(nèi)源性阿片樣物質(zhì)介導(dǎo)有關(guān)。②癌性腹痛,機(jī)制是維生素K3在體內(nèi)參與原型輔酶Ⅱ電子轉(zhuǎn)移,干擾細(xì)胞內(nèi)氧化還原代謝過(guò)程,鈣離子在細(xì)胞膜上轉(zhuǎn)運(yùn)失控,使鈣離子濃度偏高于平衡值,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。還可能使維生素K在體內(nèi)被體酶還原而產(chǎn)生半醌型自由基,阻止細(xì)胞的增殖,并能提高對(duì)放射線的敏感性,可為腫瘤放療的增敏劑使用。③腸炎,治療機(jī)制是維生素K3除能解除胃腸道平滑肌痙攣外,還能增加胃腸黏膜細(xì)胞中ATP的含量,增強(qiáng)腸黏膜的主動(dòng)吸收,還可延緩糖皮質(zhì)激素在肝臟中的分解,同時(shí)具有類氫化可的松的作用,而減輕腸黏膜炎癥,加速黏膜修復(fù)。④痛經(jīng),維生素K3治療痛經(jīng)可能與該藥有拮抗去甲腎上腺素和前列腺素F2Q[6]引起的子宮收縮作用有關(guān)。⑤泌尿系統(tǒng)結(jié)石[7],維生素K3對(duì)腎輸尿管平滑肌解除痙攣而松弛,達(dá)到止痛效果,同時(shí)對(duì)腎血管平滑肌亦解除痙攣擴(kuò)張,使腎血流量增加、尿液分泌增多、排泄加快,促使輸尿管暢通。急性腹痛發(fā)作時(shí),上述各種病理因素作用于膽道、腸道、泌尿道等處平滑肌,使其痙攣或急驟性擴(kuò)張,或由于平滑肌的痙攣刺激內(nèi)臟神經(jīng),使其成為急性腹痛產(chǎn)生的主要機(jī)制,而這些都是應(yīng)用維生素K3的藥理基礎(chǔ)。

維生素K3盡管有使轉(zhuǎn)氨酶升高及造成溶血性貧血的副作用,但本組試驗(yàn)避免了這些因素,經(jīng)臨床應(yīng)用觀察未發(fā)現(xiàn)毒副作用,無(wú)耐受性及依賴性,而且價(jià)廉、治療效果好。同時(shí)可以避免使用其他藥物如阿托品等用量過(guò)大而引起的口干等副作用,并且足三里穴位注射方法簡(jiǎn)單易行,作用迅速而有效,容易被患者接受,值得臨床推廣使用。

參考文獻(xiàn)

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[2]Feldman M,Seharsehmidt BF,Sleisenger MH.Sleisenger and Fordtran'S gastrointestinad and liver disease[M].Philadelphia:W.BSaunders Company,2001,81-86.

[3]陳玉璞.穴位注射654-2與維生素K3治療急性胃腸炎腹痛療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,1999,8(11)1873-1874.

[4]樊德厚,王永利.中國(guó)藥物大全(西醫(yī)卷)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005,

[5]陳新謙,金有豫,湯光,等.新編藥物學(xué)[M].第16版. 北京:人民衛(wèi)生出版社,2007,337.

維生素k3范文第2篇

晚發(fā)型維生素K缺乏合并顱內(nèi)出血在我國(guó)兒科臨床中發(fā)生神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥疾病最高的疾病譜之一。據(jù)資料統(tǒng)計(jì),我國(guó)出生嬰兒維生素K缺乏癥的發(fā)病率為40%[1]。亞洲地區(qū)發(fā)病率較歐美地區(qū)高,我國(guó)是高發(fā)病率國(guó)家之一。因該病病死率和致殘率均較高,存活者常留有智力障礙、肢體癱瘓、腦性癱瘓、癲癇等神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥,早期預(yù)防、救治及時(shí)、護(hù)理適當(dāng)是兒科臨床工作重點(diǎn)之一?,F(xiàn)將近一年在我科發(fā)生的病例總結(jié)如下:

1 臨床資料

1.1 一般資料 3例患兒,年齡1~3個(gè)月;男性;出生史無(wú)特殊,自然分娩3例,;母乳喂養(yǎng)2例,混合喂養(yǎng)1例;急性起病2例,亞急性起病1例;臨床表現(xiàn):腹瀉2例,發(fā)熱1例,黃疸經(jīng)檢查后患肝炎綜合征的1例;嘔吐3例;伴有皮膚、黏膜出血的2例;3例均前囟張力高,肌張力高,抽搐,昏迷1例。凝血功能均出現(xiàn)異常,頭顱CT均顯示顱內(nèi)出血。為急性輕型小兒腹瀉2例,嬰兒肝炎綜合征1例。

1.2結(jié)果 好轉(zhuǎn)1例;均合并顱內(nèi)出血、中度貧血,治療后有輕的殘疾1例;死亡2例,其中1例死于轉(zhuǎn)入我院的途中,1例因放棄治療死于家中。

2 護(hù)理

2.1監(jiān)測(cè)體溫、呼吸、心率、血壓的變化 本組患兒置于搶救室,行心電監(jiān)護(hù),立即吸氧(氧流量位0.5~1.0L/min)以減輕腦組織缺氧造成的腦細(xì)胞水腫,在用氧過(guò)程中,注意觀察供氧裝置是否通暢與漏氣。密切觀察經(jīng)皮氧飽和度在92%以上。

2.2限制頭部的活動(dòng),避免過(guò)多搬動(dòng) 采取頭部抬高15°~30°,以減輕顱內(nèi)壓,保持呼吸道通暢,使頭側(cè)向一側(cè),以利于分泌物流出,必要時(shí)給予吸痰。

2.3密切觀察意識(shí)、瞳孔、前囟張力、神志變化 觀察嘔吐的性質(zhì)、瞳孔的變化。確診后,立即肌注維生素K1注射液3~5mg。顱內(nèi)出血時(shí),其特征表現(xiàn)為煩躁不安、有抽搐或持續(xù)驚厥者促使出血加重,快速打開靜脈通道,立即使用鎮(zhèn)靜劑,用藥時(shí)認(rèn)真記錄用藥時(shí)間、劑量及抽搐改善情況。

2.4立即降顱壓,糾正休克 靜脈輸血及應(yīng)用維生素K15mg/d連續(xù)3~5d。新鮮血能提供凝血因子,可使顱內(nèi)出血迅速停止。顱內(nèi)血腫及反應(yīng)性腦水腫是危及患兒生命的主要原因,因此,顱內(nèi)壓增高明顯者,應(yīng)及時(shí)應(yīng)用20%甘露醇及速尿注射液脫水。

2.5密切觀察末梢循環(huán)等情況,尤其是穿刺點(diǎn)出血情況 靜脈輸液時(shí)給予靜脈留置針,要一針見血,避免反復(fù)穿刺加重出血,穿刺時(shí)盡量避免在同一部位進(jìn)行多次穿刺。

2.6加強(qiáng)基礎(chǔ)護(hù)理 對(duì)本組患兒應(yīng)加強(qiáng)基礎(chǔ)護(hù)理,保持床單位清潔,保持口腔、皮膚清潔,對(duì)于精神及吃奶差,給予鼻飼管喂養(yǎng)。

2.7對(duì)家長(zhǎng)的心理支持 維生素K缺乏癥患兒年齡小,顱內(nèi)出血時(shí)病情重、發(fā)展快,患兒家屬無(wú)思想準(zhǔn)備,常表現(xiàn)為驚恐、焦慮。交待有關(guān)醫(yī)學(xué)知識(shí),取得家長(zhǎng)理解,減輕家長(zhǎng)恐懼心理,取得家長(zhǎng)的最佳配合。

3 討論

本病起病急,病情來(lái)勢(shì)兇猛,尤其顱內(nèi)出血是危嬰兒生命及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的致命性出血。應(yīng)做好預(yù)防性的補(bǔ)充維生素K。根據(jù)發(fā)病年齡段,分為3型:①早發(fā)型(early VK-DB);②經(jīng)典型(classicVKDB);③晚發(fā)型(lateVKDB)[2]。母乳喂養(yǎng)是VKDB的高危因素。在晚發(fā)型VKDB病例中90%以上為母乳喂養(yǎng)兒,混合喂養(yǎng)兒不足10%。母乳維生素K含量低于牛乳[3];維生素K不易通過(guò)胎盤,嬰兒處于維生素K缺乏狀態(tài)。晚發(fā)型維生素K缺乏性出血高發(fā)地區(qū)孕婦存在亞臨床維生素K缺乏[4]。感染、肝膽疾病、應(yīng)用抗生素、未預(yù)防性應(yīng)用維生素K等是VKDB高危因素。當(dāng)小兒患有肝膽系統(tǒng)疾病或代謝性疾病時(shí),由于肝細(xì)胞受損,凝血因子產(chǎn)生減少;或由于膽汁分泌減少或缺乏,維素K吸收障礙。嬰兒存在感染而應(yīng)用頭孢類抗生素頭孢菌素可能殺滅腸道內(nèi)合成維生素K的大腸桿菌等,而使內(nèi)源性維生素K2減少;某些含有NMTT側(cè)鏈的頭孢菌素還可抑制環(huán)氧化物還原酶,阻斷維生素K循環(huán)[5]。在救治的過(guò)程中,要操作迅速而輕柔,醫(yī)、護(hù)間合理配合,在最短的時(shí)間內(nèi),監(jiān)測(cè)生命體征,止血、止驚、降顱壓,控制病情惡化,降低病死率。近幾年來(lái),VKDB仍然是對(duì)我國(guó)小兒健康造成較大危害的疾病,值得關(guān)注。

參考文獻(xiàn):

[1]胡亞美,江載芳.諸福棠實(shí)用兒科學(xué)[M].7版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:480-682.

[2]張會(huì)豐,王衛(wèi)平.小兒晚發(fā)型維生素K缺乏性出血3 970例分析[J].中國(guó)兒童保健雜志, 2004,12(1):31-32.

[3]Shearer MJ. Vitamin K deficiency bleeding(VKDB)in earlyinfancy[J].Blood Rev,2008,23(2):49-59.

維生素k3范文第3篇

劇烈痛經(jīng)來(lái)襲時(shí),熱水袋不管用、止痛片沒(méi)效果,很多患者只好往醫(yī)院急診室跑。在我院,三陰交穴位注射維生素K3(VitK3)是首選的常規(guī)治療方法之一。

20世紀(jì)80年代,我院首創(chuàng)了這一療法。多年實(shí)踐證明,維生素K3(VitK3)治療原發(fā)性痛經(jīng),2分鐘內(nèi)完全止痛率達(dá)88.34%,7分鐘內(nèi)止痛總有效率為95%;繼發(fā)性痛經(jīng)緩?fù)葱Ч?3%~65%。經(jīng)評(píng)估,本療法的止痛即刻療效及隨訪療效均明顯高于口服消炎痛。2002年,意大利醫(yī)生也以同法治療原發(fā)性痛經(jīng),結(jié)果顯示在不同種族人群取得相似止痛效果。

維生素K3治療痛經(jīng)方法成熟、具可重復(fù)性;一次穴位注射安全、未發(fā)現(xiàn)副反應(yīng);起效迅速、方法簡(jiǎn)便;價(jià)廉、患者的依從性好。因此,這一為患者提供即刻止痛幫助的有效方法,正在推廣。

治療原理:

* 三陰交穴是治療婦產(chǎn)科疾病的常用穴位。刺激三陰交穴位可影響T5-L1交感神經(jīng)纖維,誘導(dǎo)子宮平滑肌、盆底肌舒張。

* 維生素K3能拮抗5-甲基前列腺素,具有對(duì)抗PGF2 的止痛作用。

* 維生素K3 三陰交穴位注射協(xié)同誘導(dǎo)緩解痛經(jīng),提高和延長(zhǎng)針刺療效,這是常規(guī)針灸較難做到的。

哪些痛經(jīng)適合本療法:

①原發(fā)性痛經(jīng):為首選療法。

②繼發(fā)性痛經(jīng):子宮內(nèi)膜異位癥、盆腔炎、盆腔靜脈瘀血癥、婦科術(shù)后粘連、殘留卵巢綜合癥等引起的痛癥時(shí),可做為輔助治療。

哪些痛經(jīng)不適合本療法:

①全身或局部其他疾病引起的急、慢性疼痛。

② 因卵巢囊腫破裂、扭轉(zhuǎn)、急性感染等情況引起急腹痛。

③ 有凝血功能障礙者

④ 由于任何原因正在使用抗凝劑者。

Q;維生素K3穴位注射治療痛經(jīng),應(yīng)該在什么時(shí)候開始,要治多久?

A;常規(guī)的療法,是在月經(jīng)期腹痛第一天或經(jīng)前1天治療一次,連續(xù)治療三個(gè)月經(jīng)周期。通常治療時(shí),患者會(huì)有局部酸、麻、脹或有放電感,此為得氣反應(yīng)。一般無(wú)不良反應(yīng),偶有個(gè)別患者的注射部位可能有輕度淤斑、疼痛感。此時(shí)不用緊張,無(wú)需處理,幾天內(nèi)淤斑和疼痛會(huì)自動(dòng)消失。

Q;哪些醫(yī)院開展這一特色療法?

A;《三陰交穴位注射維生素K3治療痛經(jīng)臨床應(yīng)用》作為上海市衛(wèi)生局中醫(yī)適宜技術(shù)推廣應(yīng)用技術(shù),由上海市中醫(yī)藥適宜技術(shù)推廣應(yīng)用項(xiàng)目專家講師團(tuán)在上海各區(qū)級(jí)及社區(qū)醫(yī)院推廣。患者可來(lái)本院或去就近的區(qū)級(jí)或社區(qū)醫(yī)院就醫(yī)。

延伸閱讀

痛經(jīng)患者的自我保健

有嚴(yán)重痛經(jīng)的患者,一定要學(xué)習(xí)基本的醫(yī)學(xué)常識(shí)。

痛經(jīng)分為原發(fā)性和繼發(fā)性痛經(jīng)兩類。原發(fā)性痛經(jīng)大多見于青春期,月經(jīng)初潮后,有規(guī)律月經(jīng)伴痛經(jīng),婦科或超聲檢查排除婦科器質(zhì)性病變。隨著年齡增長(zhǎng),痛經(jīng)程度可能有所減輕。

繼發(fā)性痛經(jīng)以育齡期多見,常進(jìn)行性加重。疼痛可始于經(jīng)前,持續(xù)整個(gè)經(jīng)期,經(jīng)后逐漸緩解。嚴(yán)重者,疼痛時(shí)間延長(zhǎng)至經(jīng)后,月復(fù)一月,令人痛不欲生。部分患者伴有月經(jīng)過(guò)多、不孕。繼發(fā)性痛經(jīng)最多見于子宮內(nèi)膜異位癥,另外,盆腔炎、婦科術(shù)后粘連及殘留卵巢綜合征、盆腔靜脈瘀血癥等,也可引起的繼發(fā)性痛經(jīng)。

繼發(fā)性痛經(jīng)者應(yīng)以治療基礎(chǔ)疾病為根本。原發(fā)性痛經(jīng)者,經(jīng)行時(shí)如有輕微腹痛不適,不必過(guò)分在意,一般不需治療。但如痛經(jīng)影響工作、學(xué)習(xí)、生活而難以忍受,將加劇恐懼、緊張,而這些不良情緒也是導(dǎo)致子宮內(nèi)膜異位癥、不孕的高危因素,故患者必須去醫(yī)院就診,接受恰當(dāng)治療,防范痛經(jīng)嚴(yán)重進(jìn)展。

雖然本療法治療痛經(jīng)立竿見影,但為了鞏固治療效果,預(yù)防痛經(jīng)復(fù)發(fā),學(xué)會(huì)自我保健也很重要:

* 心理:了解月經(jīng)時(shí)有輕度腹痛是正常的,避免憂慮、恐懼、緊張的心態(tài)。

維生素k3范文第4篇

【摘要】 目的:為了研究維生素C對(duì)硼替佐米誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株KM-3細(xì)胞凋亡效應(yīng)的影響。方法:采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)硼替佐米15 nmol/L+10、20、40、80 μmol/L維生素C處理KM-3細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率,用流式細(xì)胞術(shù)分析Annexin-V/PI、線粒體跨膜電位(Δψm)和氧自由基(ROS),用分光光度法檢測(cè)Caspase3活性。結(jié)果:硼替佐米對(duì)KM-3細(xì)胞增殖抑制作用降低,24 hAnnexin-V陽(yáng)性細(xì)胞比例下降,ψm降低被阻止,18 h活性氧水平下降,16 h Caspase-3活性下降。結(jié)論:維生素C對(duì)硼替佐米誘導(dǎo)KM-3細(xì)胞凋亡效應(yīng)具有抑制作用。

【關(guān)鍵詞】 多發(fā)性骨髓瘤;維生素C;硼替佐米;凋亡;活性氧

[Abstract] Objective: To investigate the effect of Vitamin C on multiple myeloma cell line KM-3 apoptosis induced by Bortezomib. Methods: Cell viability inhibition ratio was estimated by counting method. Annexin-V,mitochondrial transmembrane potential(Δψm) and reactive oxygen species(ROS) labeled by DCFHDA were examined by flow cytometry, and the activity of Caspase-3 was detected by spectrophotometry. Results: The inhibition of Bortezomib on the multiple myeloma cell line KM-3 proliferation was decreased, the ratio of Annexin-V positive cells at the 24th hour declined, the decrease of ψm was prevented, the level of ROS at the 18th hour dropped, and the activity of Caspase-3 at the 16th hour declined. Conclusion: Vitamin C may abrogate the ability of Bortezomib to induce apoptosis on multiple myeloma cell line KM-3.

[Key words] Multiple myeloma;Vitamin C;Bortezomib;Apoptosis;Reactive oxygen

蛋白酶體抑制劑是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種靶向治療腫瘤的藥物。在真核細(xì)胞中80%以上蛋白降解是通過(guò)蛋白酶體介導(dǎo)的,蛋白酶體抑制劑通過(guò)對(duì)蛋白酶體的抑制劑發(fā)揮抗腫瘤作用[1]。硼替佐米是一種高選擇性,可逆的26S蛋白酶體抑制劑,是第1個(gè)進(jìn)入臨床的該類藥物。目前認(rèn)為硼替佐米的主要作用機(jī)制是抑制I-κB在蛋白酶體內(nèi)降解,使NF-κB停留在細(xì)胞質(zhì)內(nèi),功能受抑制,失去抗凋亡效應(yīng)和刺激細(xì)胞增生作用[1-2]。維生素C是一種多羥基化合物有清除氧自由基,抗氧化作用[3]。研究顯示維生素C能增強(qiáng)三氧化二砷對(duì)高發(fā)性骨髓瘤(MM)療效[4]。本實(shí)驗(yàn)探討抗氧化劑維生素C對(duì)硼替佐米誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤KM-3細(xì)胞株凋亡的影響。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞培養(yǎng) 多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株KM-3(由上海醫(yī)院血液科侯健教授惠贈(zèng))置于含10%的胎牛血清(杭州四季青生物工程有限公司產(chǎn)品)的RPMI1640培養(yǎng)液(Gibco公司產(chǎn)品)中,于37 ℃、5%CO2和95%空氣濕度條件下進(jìn)行培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,細(xì)胞以1×105細(xì)胞/ml的密度接種培養(yǎng)。

1.2 WST-1法檢測(cè)生長(zhǎng)抑制率 WST-1(碧云天生物技術(shù)研究所產(chǎn)品)在電子耦合劑存在的情況下,被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細(xì)胞增殖越多越快,則顏色越深;細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺。在450 nm處有吸收峰,生長(zhǎng)抑制率如下公式計(jì)算:

細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(%)=(1-A實(shí)驗(yàn)組/A對(duì)照組)×100%

1.3 形態(tài)學(xué)觀察 細(xì)胞收集至載玻片,用瑞氏染液染色并置于光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.4 Annexin-V分析 使用FITC標(biāo)記的Annexin-V和PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡,根據(jù)晶美生物工程有限公司提供的說(shuō)明書進(jìn)行操作。即?。?~10)萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,經(jīng)4 ℃ PBS漂洗2次,棄上清,加入250 μl Annexin V-FITC結(jié)合液重懸細(xì)胞。取100 μl移入流式細(xì)胞儀專用試管,加入5 μl Annexin V-FITC、10 μl碘化丙啶染色液輕輕混勻。室溫(20~25 ℃)避光孵育15分鐘。加入400 μl PBS輕輕混勻,用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。

1.5 線粒體跨膜電位(Δψm)檢測(cè) JC-1(碧云天生物生物技術(shù)研究所產(chǎn)品)在線粒體膜電位較高時(shí)聚集在線粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,可以產(chǎn)生紅色熒光;在線粒體膜電位較低時(shí),JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,此時(shí)JC-1為單體,可以產(chǎn)生綠色熒光。用紅綠熒光的相對(duì)比例來(lái)衡量線粒體去極化的比例。?。?0~60)萬(wàn)細(xì)胞,重懸于0.5 ml細(xì)胞培養(yǎng)液中,加入0.5 ml JC-1染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中37 ℃孵育20分鐘。600 g 4 ℃離心3~4分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清,用冰浴的JC-1染色緩沖液洗滌2次,再用0.4 ml JC-1染色緩沖液重懸后,用流式細(xì)胞儀分析。

1.6 Caspase 3活性檢測(cè) Caspase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA,pNA在405 nm附近有強(qiáng)吸收,通過(guò)測(cè)定pNA吸光度來(lái)檢測(cè)Caspase 3的活性。根據(jù)碧云天生物生物技術(shù)研究所產(chǎn)品說(shuō)明操作。600 g 4 ℃離心5分鐘收集細(xì)胞, PBS洗滌1次。取200萬(wàn)細(xì)胞加入100 μl裂解液,冰浴裂解15分鐘。4 ℃ 16 000~20 000 g離心10~15分鐘,把上清轉(zhuǎn)移到冰浴預(yù)冷的離心管中。取出10 μl加入反應(yīng)體系37 ℃溫育出現(xiàn)變色后,于405 nm測(cè)吸光度。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線確定pNA量。

1.7 活性氧檢測(cè) DCFHDA(碧云天生物生物技術(shù)研究所產(chǎn)品)自由擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞后被酯酶催化生成DCFH,DCFH不能通透細(xì)胞膜,在活性氧存在下被氧化成DCF,DCF熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)活性氧水平呈正比。DCF的激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm,吸收波長(zhǎng)為525 nm。收集一百萬(wàn)細(xì)胞懸浮于1∶5 000無(wú)血清培養(yǎng)液稀釋的1 ml DCFH-DA中,37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。用PBS洗滌細(xì)胞3次,加入200 μl PBS,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)一萬(wàn)個(gè)細(xì)胞。

2 結(jié)

2.1 硼替佐米、硼替佐米+維生素C對(duì)KM-3細(xì)胞的抑制作用 KM-3細(xì)胞經(jīng)10、25、50、75 nmol/L濃度的硼替佐米處理24 h后生長(zhǎng)抑制率的3次均值分別為40.83%、44.9%、51.2%和55.17%,48 h分別為45.9%、58.7%、71.2%和78.1%。根據(jù)48 h半數(shù)抑制濃度選擇藥物作用濃度,因此選擇硼替佐米15 nmol /L 作為藥物處理濃度。再將KM-3細(xì)胞經(jīng)硼替佐米15 nmol/L+維生素C 10、20、40、80 μmol/L作用24、48 h計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率3次均值分別為23.65%、11.1%、7.53%、4.3%;20.3%、9.8%、6.36%、3.40%(圖1)。選擇80 μmol/L作為維生素C處理濃度。

2.2 維生素C對(duì)硼替佐米誘導(dǎo)KM-3細(xì)胞凋亡作用的影響

2.2.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變 收集細(xì)胞涂片,瑞氏染色后光學(xué)顯微鏡下觀察對(duì)照組和維生素C組細(xì)胞形態(tài)正常(圖2A、2B)。硼替佐米+維生素C處理組細(xì)胞形態(tài)正常,偶見凋亡細(xì)胞(圖2C)。硼替佐米處理組可見胞膜皺縮、染色質(zhì)凝集、邊緣化、胞質(zhì)起泡(圖2D)。

2.2.2 Annexin V 分析 24 hAnnexin V FITC / PI雙標(biāo)結(jié)果顯示,硼替佐米處理組凋亡細(xì)胞比例重復(fù)3次為(16.3±1.95)%(圖3A),硼替佐米+維生素C組為(8.46±0.89)%(圖3B),低于硼替佐米處理組(P

2.2.3 線粒體跨膜電位變化 硼替佐米處理組24 h后ψM檢測(cè)顯示ψM降低,綠色熒光細(xì)胞比率重復(fù)3次為(11.32±1.86)%(圖4A),高于硼替佐米+維生素C處理組(5.1±0.91)%(P

2.2.4 Caspase-3 活性 硼替佐米處理組16 h后3個(gè)平行組產(chǎn)生的pNA為25.21±0.349 μmol。 硼替佐米+維生素C處理組為21.79±0.198 μmol,低于硼替佐米組(P

2.2.5 活性氧水平變化 18 h后平均熒光強(qiáng)度硼替佐米+維生素C處理組為30.2±1.96(圖5A)低于硼替佐米處理組為52.23±1.9(圖5B)(P

3 討 論

維生素C是具有許多生物學(xué)功能水溶性的葡萄糖類物質(zhì)。Sestili等[5]認(rèn)為高劑量維生素C有親氧化作用,低劑量有抗氧化作用。維生素C既能防止化療藥物對(duì)腫瘤及正常組織的損傷[6],又能協(xié)同化療藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡[7]。體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明,低濃度的維生素C(4 mmol/L)對(duì)SW620纖維瘤細(xì)胞有保護(hù)作用,而高劑量(>20 mmol/L)對(duì)細(xì)胞有殺傷作用[8]。

本實(shí)驗(yàn)中Annexin V/PI分析顯示加入維生素C后,細(xì)胞早期凋亡率明顯下降。硼替佐米處理24 h后細(xì)胞呈典型凋亡改變,加入維生素C后細(xì)胞形態(tài)大體正常。所以認(rèn)為維生素C在較低濃度(80 μmol/L)下有抑制硼替佐米對(duì)KM-3凋亡的誘導(dǎo)作用。

誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有3種信號(hào)通路: 死亡受體信號(hào)通路、線粒體信號(hào)通路和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號(hào)通路, 目前認(rèn)為線粒體途徑在凋亡過(guò)程發(fā)揮樞紐作用[9]。氧化刺激、Ca2+過(guò)量攝取等誘導(dǎo)因素導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡,都有線粒體跨膜電位消失。因而線粒體跨膜電位的消失標(biāo)志著一個(gè)不可逆轉(zhuǎn)的凋亡過(guò)程。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)加入維生素C后線粒體膜電位崩潰的綠色熒光細(xì)胞比率較硼替佐米處理組顯著降低。

Caspase蛋白酶家族是引起細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶,實(shí)驗(yàn)顯示KM-3細(xì)胞經(jīng)硼替佐米作用16 h后pNA產(chǎn)生增加Caspase-3活性較對(duì)照升高,加入維生素C后pNA產(chǎn)生減少,酶活性下降。

正常情況下NF-κB是一種核轉(zhuǎn)錄因子,在細(xì)胞質(zhì)中與抑制劑I-κB相互作用形成復(fù)合體,防止NF-κB進(jìn)入核內(nèi),NF-κB介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄作用被阻斷;一旦I-κB磷酸化與NF-κB解離,NF-κB進(jìn)入核內(nèi)誘導(dǎo)抗凋亡蛋白的合成,細(xì)胞增生并表達(dá)黏附分子導(dǎo)致細(xì)胞增生、存活;而在MM瘤細(xì)胞中NF-κB組成性激活,導(dǎo)致瘤細(xì)胞不斷增生。如果I-κB在蛋白酶體內(nèi)降解受抑制,NF-κB停留在細(xì)胞質(zhì)內(nèi),功能受抑制,失去抗凋亡效應(yīng)和刺激細(xì)胞增生作用[10-11]。目前認(rèn)為這是硼替佐米的主要作用機(jī)制,但硼替佐米并不僅僅通過(guò)抑制該通路發(fā)揮作用,還存在其他作用機(jī)制。

活性氧是細(xì)胞凋亡的信號(hào)之一,活性氧的產(chǎn)生可直接或間接改變線粒體膜電位,促進(jìn)CytC從線粒體內(nèi)釋放,啟動(dòng)線粒體信號(hào)通路[12]。陳麗娟等[13]研究發(fā)現(xiàn)硼替佐米可改變多發(fā)性骨髓瘤U266細(xì)胞株內(nèi)氧化還原狀態(tài),導(dǎo)致線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)產(chǎn)生活性氧增多,從而誘導(dǎo)U266細(xì)胞凋亡。由此推測(cè),線粒體途徑參與了硼替佐米誘導(dǎo)的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株U266細(xì)胞凋亡。

實(shí)驗(yàn)中用DCFHDA作為熒光探針測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平時(shí),發(fā)現(xiàn)維生素C降低了硼替佐米產(chǎn)生的活性氧水平,降低了無(wú)誘導(dǎo)因素作用的對(duì)照組細(xì)胞活性氧水平。因而認(rèn)為維生素C能清除胞內(nèi)活性氧,正是該作用降低硼替佐米誘發(fā)的活性氧水平,阻止了線粒體膜電位的崩潰。

本實(shí)驗(yàn)探討了維生素C在體外環(huán)境、低濃度下對(duì)硼替佐米作用影響,至于高濃度及體內(nèi)條件下的作用需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

維生素k3范文第5篇

A:基本上,母乳含有各種寶寶所需要的營(yíng)養(yǎng)素,是寶寶最佳、最豐富的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,哺喂母乳不但能提高寶寶對(duì)疾病的抵抗力,也是寶寶最安全經(jīng)濟(jì)的食品,同時(shí)也有助于拉近親子感情。但也因?yàn)槿绱?,哺乳媽媽的身體健康狀況及飲食攝取習(xí)慣,便會(huì)直接影響到母乳的品質(zhì)及寶寶的健康,因此建議哺乳媽媽要均衡攝取六大類食物(五谷根莖類、蛋豆魚肉類、奶類、水果類、蔬菜類及油脂類),不要偏食。也盡量避免在哺育期間減肥,母乳的產(chǎn)量可能就不足,寶寶也會(huì)跟著變瘦、營(yíng)養(yǎng)失衡。

另外需要注意的是,吃全素的哺乳媽媽,由于完全不攝取蛋類、奶類,建議增加維生素B1 2的補(bǔ)充,避免母子兩人在維生素B1 2不足的情況下,造成惡性貧血的問(wèn)題。

Q:為什么缺乏維生素E時(shí)會(huì)造成溶血性貧血現(xiàn)象,且容易發(fā)生在嬰兒及早產(chǎn)兒身上?該如何補(bǔ)充呢?

A:維生素E具有抗氧化的功能,能夠清除自由基,保護(hù)紅血球,避免貧血發(fā)生。不過(guò)寶寶在出生時(shí),維生素E通過(guò)胎盤的量很少,如果媽媽本身在飲食過(guò)程中攝取的維生素E又不足,就會(huì)導(dǎo)致寶寶維生素E缺少。

維生素E的主要食物來(lái)源是小麥胚芽,因此不妨通過(guò)小麥胚芽油、葵花油、花生油以及深綠色蔬菜來(lái)補(bǔ)充維生素已

另外提醒媽媽們,如果寶寶是早產(chǎn)兒、低體重兒,也可以考慮適當(dāng)增加一些維生素滴劑,以免發(fā)生溶血性貧血。

Q:剛出生的嬰兒為什么容易缺乏維生素K?要如何幫助寶寶補(bǔ)充呢?

A:維生素K群,包括綠色菜葉中的維生素K1、由腸道細(xì)菌自行合成的維生素K2以及合成的維生素K3三種。由于維生素K無(wú)法通過(guò)胎盤提供,且新生兒的腸道屬于無(wú)菌狀態(tài),無(wú)法自行合成維生素K,因此醫(yī)師會(huì)視情況給新生兒補(bǔ)充。

另外,如果寶寶感冒、服用抗生素,也會(huì)破壞腸道內(nèi)的細(xì)菌,影響到維生素K2的合成。若寶寶已經(jīng)開始添加輔食,不妨幫寶寶添加肉類或少量肝臟類,如熬煮排骨湯或者肝泥等。

Q:怎么幫寶寶補(bǔ)充維生素C呢?喝市售的果汁可以嗎?該如何喂食呢?

A:攝取水果是補(bǔ)充維生素c的最好方式,如橙子、獼猴桃、橘子等都是富含維生素c的水果。不過(guò),維生素c遇到空氣很容易發(fā)生氧化、且在加工的過(guò)程中很容易遭到破壞,因此制作果汁時(shí),盡量減少加工程序,以“現(xiàn)做、現(xiàn)用”為原則,剛開始添加果汁時(shí),先以1:1的比例加涼開水稀釋,再逐漸增加濃度。對(duì)于市售的果汁應(yīng)該選擇營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高的純果汁,添加方式也應(yīng)該由稀到濃。

另一方面,家長(zhǎng)習(xí)慣在吃飯時(shí)候喂食寶寶果汁,營(yíng)養(yǎng)師建議家長(zhǎng),最好在餐后喂食,因?yàn)榫S生素c有助于鈣質(zhì)、鐵質(zhì)的吸收,營(yíng)養(yǎng)吸收效果會(huì)更好。

Q:多曬太陽(yáng),為什么有助于增加人體的維生素呢?

A:一些父母怕把寶寶曬黑了,而不愿意帶寶寶出門,其實(shí)寶寶曬太陽(yáng)也能增加維生素。因?yàn)槿梭w皮膚含有去氫膽固醇,經(jīng)陽(yáng)光紫外線照射后會(huì)自動(dòng)形成活化性的維生素D3,在體內(nèi)可以幫助鈣質(zhì)吸收,適當(dāng)讓寶寶做日光浴,不但能讓寶寶習(xí)慣外部環(huán)境,也能補(bǔ)充維生素。