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【摘要】目的建立地喹氯銨含片的含量測定及含量均勻度的方法。方法采用HPLC法，以0.005mo1/L庚烷磺酸鈉溶液甲醇乙腈三乙胺（體積比200∶75︰225︰2.5）（用磷酸調(diào)至pH值3.5）為流動相；檢測波長：240nm；流速：1.0mL·min-1。結(jié)果地喹氯銨在5～22.5μg·mL-1線性關(guān)系良好，r=0.999（n=7），平均回收率為100.4％、RSD＝1.38％。用本法對試制品與市售品的含量均勻度、含量進行測定，結(jié)果說明本公司的研制品達到上市品的要求。結(jié)論本文為地喹氯銨含片的產(chǎn)品評價及質(zhì)量標(biāo)準的完善提供了一定的試驗數(shù)據(jù)。

【關(guān)鍵詞】地喹氯銨含片；地喹氯銨；HPLC

地喹氯銨口含片是一個對口腔咽喉頭細菌感染有良好療效的制劑，是非抗生素類藥，有對革蘭氏陰、陽性菌等病原菌作用明顯的廣泛的抗菌譜，并對抗酸桿菌及真菌均有較強的殺滅作用，對組織無刺激性［1～4］。該藥品的原料和制劑在國內(nèi)外均有研究和批準上市，原料藥在我國的國家藥品標(biāo)準及日本藥局方外醫(yī)藥品成分規(guī)格書以及英國藥典記述的含量測定方法都采用非水滴定法；其制劑含量測定采用HPLC測定法，但色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗內(nèi)容不同。采用現(xiàn)行標(biāo)準及條件［5－6］對地喹氯銨片劑進行含量測定及含量均勻度的檢測，結(jié)果地喹氯銨主峰和雜質(zhì)峰無法達到有效分離。為進一步控制其質(zhì)量，本文參考日本制劑中的檢驗方法，優(yōu)化其色譜條件，使地喹氯銨主峰和相鄰雜質(zhì)峰達到有效分離。用優(yōu)化后確立的含量測定方法對本公司的研制品與市售品地喹氯銨含片進行質(zhì)量對比研究，結(jié)果顯示本公司的研制品達到上市品的要求。

1儀器與試藥

儀器：WATERS600E高效液相色譜儀（美國WATERS公司）；UV2201紫外-可見光分光光度計；（日本島津）；METTLERAE240電子天平（瑞士METTLER）；PHS3C精密酸度計（上海雷磁儀器廠）；試劑：乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；地喹氯銨對照品（中國藥品生物制品檢定所暫時未有供應(yīng)，由日本明治制果提供，含量測定用，純度為100%，批號：DCWS-65-1）；地喹氯銨含片（規(guī)格：0.25mg/片）及缺地喹氯銨的空白輔料對照樣品（汕頭經(jīng)濟特區(qū)明治醫(yī)藥有限公司）。

2色譜條件

色譜柱DIKMADiamonsilC18（250m×4.6mm,5μm）；流動相：0.005mol/L庚烷磺酸鈉溶液甲醇乙腈三乙胺（體積比200∶75∶225∶2.5）（用磷酸調(diào)至pH值3.5）；檢測波長：240nm；流速：1.0mL·min-1，進樣量：20μL。在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)大于3000，分離度大于5，主峰的保留時間在7~8min。見圖1。

圖1地喹氯銨含片HPLC圖譜（略）

Fig.1HPLCchromatogramofdequaliniumchloride

3含量測定

3.1溶液制備

3.1.1對照品溶液的制備精密稱取在105℃干燥至恒重的地喹氯銨對照品適量，加甲醇水磷酸（體積比15∶5∶1）混合液（下簡稱稀釋劑）溶解并定量稀釋制成每1ml中含10μg的溶液。

3.1.2供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當(dāng)于地喹氯銨0.25mg），置25mL量瓶中，加稀釋劑適量，經(jīng)超聲處理3min，放冷，并稀釋至刻度，搖勻，濾過。

3.2測定方法精密量取對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。

3.3專屬性取上述對照品溶液及按制劑處方配制的缺地喹氯銨的空白輔料對照樣品溶液，按照測定方法，分別進樣20μL，記錄色譜圖。結(jié)果空白輔料對樣品的測定無干擾，見圖2。

圖2空白輔料HPLC圖譜（略）

Fig2HPLCchromatogramofexcipients

3.4線性關(guān)系考察精密稱取在105℃干燥至恒重的地喹氯銨對照品12.5mg，置50mL量瓶中,用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液。精密吸取該貯備液05、0.75、1、1.5、1.75、2、2.5mL分別置25mL量瓶中,用稀釋劑稀釋至刻度，制成一系列濃度的對照品溶液,按“3.2”項下的方法測定,記錄色譜圖，以對照品進樣量（ρ）對其相應(yīng)的峰面積積分值（A）進行線性回歸，結(jié)果地喹氯銨在5～22.5μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，線性回歸方程：A=29939843＋81974.28,r=0.9995。

3.5回收率試驗分別精密稱取空白輔料及在105℃干燥至恒重的地喹氯銨對照品,配制成80%、100%、120%3個濃度梯度，按“3.2”項下方法分別進樣測定含量并計算回收率，每個濃度梯度分別進行3次平行試驗。結(jié)果見表1。

3.6精密度試驗精密量取對照品溶液，依照“3.2”項下方法測定峰面積，重復(fù)進樣6次，計算峰面積平均值及RSD值，結(jié)果平均峰面積為1304846.3，RSD=024%。

3.7重現(xiàn)性試驗取同一批號樣品6份，依照“3.2”項下的方法分別測定，計算6次測定結(jié)果的平均值和RSD值，結(jié)果平均質(zhì)量分數(shù)為94.8%，RSD=0.97%。

3.8穩(wěn)定性試驗取同一份樣品溶液，置室溫下，分別于0、0.5、1、2、4、6、8h按照“3.2”項下方法測定峰面積，結(jié)果RSD為0.19%，表明樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

表1回收率試驗（略）

Tab.1Resultsofrecoverytest

3.9樣品測定結(jié)果精密量取9個批號本品適量，分別照“3.2”項下的方法測定，9批樣品測定結(jié)果見表2。

表2含量測定結(jié)果（略）

Tab.2Contentsofdequaliniumchloridebuccaltablets

4含量均勻度

取本品1片，置乳缽中，研細，用甲醇水磷酸（體積比15∶5∶1）混合溶液20mL分次研磨并移至25mL量瓶中，經(jīng)超聲處理3min，放冷，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，制成供試品溶液。按“3.1.1”項的方法制備對照品溶液,按“3.1.3”項的方法測定，計算出每片含地喹氯銨的量。結(jié)果見表3。

5研制品與市售品比較

以本文方法對本公司研制的地喹氯銨含片與市售品分別進行含量均勻度、含量測定，結(jié)果本公司研制品與上市品的含量及含量均勻度均符合規(guī)定，說明本公司的研制品達到上市品的要求，見表4。

表3含量均勻度測定結(jié)果（略）

Tab.3Resultsofweightvariationofdequaliniumchloridebuccaltablets

表4研制品與市售品的測定結(jié)果（略）

Tab.4Resultsofdeterminationofdifferentsamples

6討論

6．1檢測波長的選擇取供試品溶液適量，加稀釋劑溶解并稀釋，在200～400nm之間進行紫外掃描，結(jié)果在240nm處有較高的響應(yīng)值，文獻［5］的檢測波長也是240nm，故選擇240nm為本法的檢測波長。

6．2流動相的選擇實驗中采用國家藥品標(biāo)準［5］的流動相組分：0005mol/L庚烷磺酸鈉溶液甲醇乙腈三乙胺（20∶60∶20∶0.5），主峰與雜質(zhì)峰卻無法得到分離；采用日本資料中地喹氯銨含片含量測定所采用的流動相組分：正己烷磺酸鈉溶液甲醇三乙胺（體積比52∶48∶0.5），主峰與雜質(zhì)蜂能得到較好分離，但主峰的出峰時間在20min以上，實驗過程中需保持柱溫50℃,并且是采用內(nèi)標(biāo)法進行測定；為縮短地喹氯銨主峰完全被洗脫的時間，考慮在流動相中增加有機相乙腈，同時為與國家藥品標(biāo)準保持一致，把日本資料中的正己烷磺酸鈉溶液改為庚烷磺酸鈉溶液，并對各組分的比例進行調(diào)整后，得出流動相最佳組分及比例關(guān)系為0.005mol/L庚烷磺酸鈉溶液甲醇乙腈三乙胺（體積比200∶75∶225∶2.5），實驗證明，采用此流動相及流速1mL/min，主峰的保留時間只需7～8min，并可保持柱效、峰形均較好（見圖1），實驗過程中對柱溫?zé)o特別要求，在常溫（10～30℃）下實驗結(jié)果重現(xiàn)性均好。

6．3流動相pH值的選擇考慮到普通的十八烷基鍵合硅膠色譜柱在pH＞2.0時使用較合適，對該流動相pH值從pH3.0～pH8.0進行考察，結(jié)果表明流動相pH值越低，地喹氯銨的峰形越好，pH值在3.5時，能得到的較好峰形及最佳的柱效，該pH值與文獻［5］一致。

6．4耐用性的考察分別使用國內(nèi)外不同品牌十八烷基鍵合硅膠色譜柱，使用該色譜條件對同一批樣品進行測定，其結(jié)果基本一致，表明方法的耐用性較好。

6．5方法的優(yōu)點本文的方法學(xué)研究結(jié)果表明，本法結(jié)果準確，重現(xiàn)性與耐用性好，主峰與雜質(zhì)蜂能得到有效分離，且主峰的保留時間只需7～8min?？勺鳛橘|(zhì)量標(biāo)準中含量及含量均勻度測定的方法。

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