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【摘要】目的：研究中藥對骨質(zhì)疏松大鼠骨骼肌形態(tài)學(xué)指標的影響。方法：SD雌性大鼠去勢后，分為正常對照組（SHAM）、去卵巢手術(shù)組（OVX）、雌激素組(OVX+ES)、中藥組（OVX+TCD），SHAM組、OVX組予蒸餾水，OVX+TCD予骨康灌胃給藥，OVX+ES組給予尼爾雌醇灌胃，正常對照組給予蒸餾水灌胃。治療3個月后取左側(cè)骨直肌檢測。結(jié)果：各指標中，去卵巢對照組與正常組比較均有顯著差異（P<0.01），表明骨質(zhì)疏松大鼠模型的骨骼肌存在著較明顯的退變。激素組能明顯增粗骨骼肌纖維（P<0.01），中藥組次之（P<0.05），且中藥組與激素組比較無顯著差異；激素組能使骨骼肌橫截面積及骨骼肌纖維周長明顯增加（P<0.01），中藥組次之（P<0.05）；且中藥組與激素組均能明顯減少單位面積骨骼纖維數(shù)目（P<0.01）。結(jié)論：中藥骨康能夠提高骨骼肌纖維橫截面積、周長，但其作用較雌激素弱。

【關(guān)鍵詞】骨質(zhì)疏松；中藥；骨骼；肌形態(tài)學(xué)；大鼠

骨折是骨質(zhì)疏松癥最為常見的繼發(fā)疾病，骨折后對運動能力、一般健康水平、社會行為能力、精神狀態(tài)等都有顯著的影響，甚至危及到生命。目前關(guān)于骨質(zhì)疏松性骨折的研究中，除了認為骨質(zhì)量降低是骨折發(fā)生的主要原因外，骨骼肌的退變也逐漸被人們所認識，在此次研究中我們觀察了中藥骨康對骨質(zhì)疏松大鼠骨骼肌的作用，觀測肌形態(tài)學(xué)相關(guān)指標，探討中藥在治療骨質(zhì)疏松癥過程中的多重作用。

1材料與方法

1.1藥物及試劑中藥骨康由淫羊藿、補骨脂、丹參、黃芪等10味中藥組成，其提取液含生藥量1.43g/mL，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬骨傷科醫(yī)院制劑室提供；尼爾雌醇片由上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號：060702。

1.2動物及分組選用6月齡健康雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠58只，體重260~290g，清潔級，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：2003A010。隨機抽取10只作動物模型監(jiān)測，剩余48只隨機分為4組，分別為正常對照組（SHAM）、去卵巢手術(shù)組（OVX）、雌激素對照組（OVX+ES）、中藥組（OVX+TCD）。所有大鼠均在廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物中心清潔級動物實驗室分籠飼養(yǎng)，相對濕度40%~70%，溫度18~29℃，空氣潔凈度100000級，菌落數(shù)≤12.2個/皿，噪音≤60dB，晝夜明暗交替時間12/12h。自由進食標準飼料和飲用水。

1.3動物模型制備按去卵巢骨質(zhì)疏松動物模型要求進行手術(shù)動物模型的制備[1]。用10%水合氯醛溶液按0.33mL/100g腹腔注射麻醉，俯臥位固定，在背部中1/3處剪毛，自腰椎背部中線向下作縱行切口長2~3cm，沿肩胛線分別于兩側(cè)肋下剪開腰肌，可見位于腎臟外下方的卵巢及與其相連的子宮角，對10只抽檢大鼠和OVX組、OVX+ES組、OVX+TCD組的大鼠均行手術(shù)結(jié)扎并切斷子宮角，完整切除雙側(cè)卵巢，切口縫合，完成手術(shù)造模；SHAM組大鼠行假手術(shù)，采用同樣的麻醉和手術(shù)入路，找到卵巢后，切除卵巢附近的部分脂肪后即關(guān)閉。切除的組織交專人檢查以確保組織的完整性，并通過組織學(xué)檢測確實組織的正確性。術(shù)后所有大鼠按1.6萬U/100g肌肉注射青霉素，每天1次，連續(xù)3d，防止術(shù)后感染。手術(shù)前、術(shù)后3月對抽檢大鼠分別采用DXA進行全身骨密度測定，用于證實本次實驗大鼠在切除卵巢術(shù)后3個月出現(xiàn)了骨質(zhì)疏松的改變，造模成功。

1.4治療方法手術(shù)后正常飼養(yǎng)3月后開始治療，治療時間為3個月。SHAM組、OVX組以蒸餾水10mL/kg灌胃，1次/d；OVX+TCD組按4.8g/kg骨康（相當(dāng)于臨床劑量的10倍），灌胃給藥，每天1次；OVX+ES組給予尼爾雌醇1mg/kg灌胃，使用前配成混懸液（濃度為0.167mg/mL），1次/周，正常對照組每天給予蒸餾水10mL/kg灌胃。

1.5取材方法實驗過程中SHAM組12號、OVX+TCD組8號在進行活體骨密度檢查時因麻醉過深死亡。剩余動物采用斷頭處死的方法，在治療后3個月后全部處死。處死后取左側(cè)股直肌稱量濕重后，分別放入10%中性福爾馬林磷酸緩沖液中固定待行組織學(xué)檢測。

1.6實驗指標測試方法

斷頭處死大鼠，取出左側(cè)股直肌分別用電子天平稱量濕重后，再放入10%中性福爾馬林磷酸緩沖液中固定24h，用70%~100%各級酒精脫水，二甲苯透明兩次，浸蠟，石蠟包埋、切片（片厚約5m）、HE染色，封固好的切片置于20×20倍鏡下觀察骨骼肌組織形態(tài)變化[2，3]并照取圖像，經(jīng)由ImageProPlus5.0軟件測量骨骼肌纖維平均直徑、平均面積、周長及單位面積下骨骼肌纖維數(shù)量（由于均采用了400×圖像，具備同樣放大率及標尺，其數(shù)值結(jié)果即能進行比較分析，所以未進行實際單位換算）。

1.7統(tǒng)計方法全部計量資料采用x±s表示，統(tǒng)計處理軟件系統(tǒng)采用SPSS10.0。數(shù)據(jù)組間比較采用單因素方差分析（OnewayANOVA），造模手術(shù)前后數(shù)據(jù)采用自身配對T檢驗，兩種數(shù)據(jù)的相關(guān)性采用相關(guān)性分析。

2結(jié)果

2.1各組大鼠骨骼肌的變化肉眼檢查：各組大鼠股直肌大小、形狀均正常，外膜光滑，未見滲出物，表面及切面未見出血點及壞死灶。鏡下觀察：各組肌組織排列結(jié)構(gòu)未見異常，間質(zhì)未見明顯炎性細胞浸潤和血管增生。

2.2各組大鼠骨骼肌形態(tài)學(xué)指標比較如表1、圖1所示，各指標中，去卵巢對照組與正常組比較均有顯著差異（P<0.01），表明骨質(zhì)疏松大鼠模型的骨骼肌存在著較明顯的退變。在改善去卵巢大鼠骨骼肌纖維直徑方面，激素對照組能明顯增粗骨骼肌纖維（P<0.01），中藥組次之（P<0.05），且中藥組與激素對照組比較無顯著差異；在改善去卵巢大鼠骨骼肌橫截面積和骨骼肌纖維周長方面，激素對照組能使骨骼肌橫截面積及骨骼肌纖維周長明顯增加（P<0.01），中藥組次之（P<0.05）；在減少單位面積骨骼肌纖維的數(shù)目方面，中藥組與激素對照組均能明顯減少其數(shù)目（P<0.01）。

結(jié)果表明：中藥能夠在一定程度上改善骨骼肌的素質(zhì)，但在本研究中，其能力較雌激素弱。

3討論

如果不考慮性別、年齡和身高，局部肌肉強度是決定整個骨骼強度的重要因素[4]。在日常生活中骨骼最大的載荷來自肌肉的主動收縮，研究顯示肌肉強度和肌肉含量與其附著骨骼的骨量呈正相關(guān)[2]。Frost[3]認為，肌力決定骨結(jié)構(gòu)和骨量。張林提出[5]肌肉強度和骨強度具有緊密相關(guān)性，二者之間的比值處于恒定值，因此，如何保持肌肉強度，對控制后天的骨強度和骨量是十分重要的。童普德[6]提出：作為一個完整的運動功能單位，骨與肌肉是緊密聯(lián)系在一起的，肌力、肌組織質(zhì)量和BMD之間顯著相關(guān)，通過肌肉的收縮對骨產(chǎn)生應(yīng)力負荷，也是治療骨質(zhì)疏松癥的有效方法。另外，肌肉強度增加的同時，不僅改善了病人的平衡能力、動作的敏捷度，從而預(yù)防跌倒，還能夠為骨骼系統(tǒng)提供強有力的動力系統(tǒng)，防止骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)的有害運動，在Anna[7]的研究中就提到，背肌肌力的增強，對老年婦女的駝背畸形有著明顯的預(yù)防作用，說明在維持脊柱的正常結(jié)構(gòu)中有著非常重要的作用。骨骼肌衰弱是老年人常見的增齡性病癥。許多學(xué)者從不同角度探索了老年性骨骼肌衰弱的發(fā)病機理。絕大多數(shù)研究證實了增齡對老年人骨骼肌的運動單位募集水平、結(jié)構(gòu)及代謝功能都產(chǎn)生很大的影響。肌纖維蛋白的含量可以在一定程度反映肌纖維面積和肌肉力量，肌肉的抗氧化能力可反映出肌肉的衰老程度。形態(tài)學(xué)方面研究指出，老年人骨骼肌肌力下降與肌肉體積萎縮正相關(guān)。肌肉的組織學(xué)檢查能對肌肉的形狀、功能狀態(tài)作一基本了解。

本研究中，大鼠切除卵巢后，相對于未切除卵巢的大鼠，骨骼肌在組織形態(tài)學(xué)上發(fā)生了改變，主要表現(xiàn)在骨骼肌纖維直徑、橫截面積、周長上的縮小，同時在單位面積上骨骼肌的數(shù)量是增大的，這些結(jié)果表明，大鼠經(jīng)去勢后，骨骼肌存在著明顯的萎縮現(xiàn)象，這樣的變化最終導(dǎo)致的結(jié)果是骨骼肌力量、耐力等的降低，削弱了肌系統(tǒng)的運動能力。而經(jīng)過激素及中藥治療后，各項指標均有顯著的提升，其效果以激素最為顯著，中藥稍弱。其中骨骼肌纖維的直徑、橫截面積和周長的增高趨勢一致，均是按激素、中藥、正常、去卵巢這樣一個順序遞增，且激素、中藥與正常組間均存在差異；而單位橫截面積上的骨骼肌纖維數(shù)量上雖然也存在同樣趨勢，但激素組與中藥組間未見明顯差異，這可能是因為我們只觀測了骨骼肌纖維的各項參數(shù)，而肌纖維間組織在圖像分析中具有一定的干擾作用有關(guān)。

在絕經(jīng)后髖部骨質(zhì)疏松性骨折的風(fēng)險研究中，有人提出：進行絕經(jīng)后婦女髖部骨折風(fēng)險的綜合預(yù)測時，必須同時考慮骨內(nèi)因素與骨外因素，骨內(nèi)因素主要指骨的量和質(zhì)，而骨外因素主要是肌肉的狀況。肌肉無論是在參與神經(jīng)肌肉功能發(fā)揮身體平衡與姿勢協(xié)調(diào)，還是參與摔倒力學(xué)中的能量吸收與保護性反應(yīng)的過程中，都占有不可替代的地位[8]。所以保持肌肉質(zhì)量和功能的正常對骨質(zhì)疏松患者具有重要意義?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，淫羊藿、補骨脂等補腎中藥含有黃酮類物質(zhì)，具有植物雌激素的作用特點，其中異黃酮具有控制雌激素受體的作用，既可表現(xiàn)較弱的雌激素作用，也可呈現(xiàn)雌激素拮抗劑的特點，并有種屬的特異性[9]。異黃酮作為較弱的雌激素激動劑或拮抗劑，可以抑制破骨細胞的活性，增強成骨細胞的活性，維持成骨細胞和破骨細胞之間的動態(tài)平衡，有效地預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松，又可避免或減少對機體帶來其他的副作用。

本實驗結(jié)果表明，中藥能夠在改善肌肉形態(tài)學(xué)方面，有一定作用，從而證明中藥能夠改善肌素質(zhì)，但較雌激素弱。所以我們認為，中藥能夠在治療骨質(zhì)疏松癥的同時，增強肌系統(tǒng)的素質(zhì)，從而預(yù)防骨折發(fā)生，并減少運動損傷。但仍需深入研究，尋找更為安全有效的，在能夠治療骨質(zhì)疏松癥的同時，又對肌系統(tǒng)具有較強作用的組方。

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