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1.1缺失完善的教學管理制度修訂步驟。
當下我國大多數(shù)的高等院校出臺教學管理制度,基本上都是經(jīng)過學習獲得后,結(jié)合學校實際而產(chǎn)生的,這樣做的結(jié)果是將大學生們在管理活動中充分發(fā)揮的作用或影響力忽視。特別是與被管理者自身利益密切相關的學籍管理政策,他們的發(fā)言權與知情權沒有被尊重。國家關系民生的有關政策都要召開聽政會議,作為民主、科學、文明的高校為何不這么做呢?
1.2學生主動參與學校教學改革、教學管理的意識不夠強烈。
1.3缺乏通暢透明的政策規(guī)定、教學改革信息渠道。
當下由教務處在網(wǎng)絡上進行通知教改的相關規(guī)定政策,由此通知高校的各個學院,然后再通過班會經(jīng)老師通知到學生班級或者通過宣傳欄,從而造成部分通知不能及時到位,有的不負責任的干脆就沒有通知,最終導致信息傳播不通暢,時常引起學生舉報等不良事件的出現(xiàn)。
2高等醫(yī)學院校學生參與教學管理的主要形式
根據(jù)以上現(xiàn)狀,如何推進高校教學管理科學民主化進程,如何提高高校教學管理效果,尊重學生的合法權益,吸納在校大學生積極參加到高等學校的日常教學管理工作中,在我校提倡學生參與教學管理工作具有十分重要的意義。當前高等院校醫(yī)學生參與教學管理的主要形式有以下幾種:
2.1學生參與具體教學過程管理
學生對教學計劃、課程、教師等直接進行評價和選擇是學生參與教學管理的主要的表現(xiàn)形式之一。當前我國國內(nèi)絕大多數(shù)高校都已經(jīng)把醫(yī)學生的評價結(jié)果納入到學校對于教師教學質(zhì)量的非常重要的評價依據(jù)。早期醫(yī)學生參與評教的方式采用的是問卷調(diào)查的形式,然后出現(xiàn)了醫(yī)學生涂機讀卡,最后發(fā)展到網(wǎng)絡進行評教,醫(yī)學生可以通過上網(wǎng)評價授課教師的教學效果,依據(jù)學生的評價結(jié)果學校教學相關部門進行反饋。
2.2建立學生組織,參與學校管理
建立學生組織也是一種比較常見的學生參與學校管理的形式。在美國,學生組織是校內(nèi)學生的群眾性組織,它由各層次的學生代表組成,選舉產(chǎn)生執(zhí)行委員會,代表學生的利益與學校聯(lián)系和交涉。在英國,1922年成立了全國學生聯(lián)合會(NationalUnionofStudents),代表著20多萬學生。它的工作內(nèi)容非常廣泛,對學校也有著巨大的影響力。在我國,高校中也都建立了學生會、團代會等學生組織。學校設立校長信箱,在行政部門中設立學生工作部、團委等部門與學生會進行溝通。
3醫(yī)學生參與教學管理的意義
3.1促進了學校教學質(zhì)量保障體系的完善
以往學校的質(zhì)量保障體系主要由專家、領導、教師等組成,作為學校教學主體的學生一環(huán)一直處于缺失狀態(tài)。學生教學信息員制度使學生參與教學管理成為一種常態(tài)、長效管理模式,從學生角度將學校教育教學過程中存在的問題及時反映出來,并且形成一套工作流程,使學生反映的信息能夠及時解決和落實。
3.2在校大學生積極主動的參加到高等院校教學管理工作的積極性和主動性能夠被充分的調(diào)動起來
在校大學生積極主動的參加到高等院校,將會明顯增加他們的主人翁意識和責任感,學生能夠認真地去發(fā)現(xiàn)學校教育教學過程中存在的各種問題,學校能夠重視學生反映的問題,著力去落實解決問題。學生看到自己反映的問題得到了及時解決,又促進了他們更加主動地去履行學生教學信息員的職責,形成一個良性的循環(huán)。
3.3對于教學管理效率的提高大有裨益
建立健全教務助理員、在校大學生教學信息員隊伍,將會讓高校教學管理能夠左右縱橫、上下貫穿,最終實現(xiàn)管理的網(wǎng)絡化以及交叉化,能夠更加真實迅速的獲取信息,更加通暢的安排工作,更加方便檢查、落實、監(jiān)管,得到更好的服務。
3.4具體體現(xiàn)了教育部有關學生民主參與學校管理的規(guī)定“學校應當建立和完善學生參與民主管理的組織形式,支持和保障學生依法參與學校民主管理。”明確寫在《普通高等學校學生管理規(guī)定》第四章第四十一條上。
3.5確實為培養(yǎng)學生能力建立了一個很好的平臺
第一,已經(jīng)具有民主參與管理能力的在校醫(yī)學生占到了相當?shù)谋壤?。第二,在校醫(yī)學生已經(jīng)具備了科學合理的判斷、分析高等院校的管理制度的能力。舉例來說,建立了在校大學生教學管理委員會,構建了非常好的平臺從而能夠貫徹培養(yǎng)在校大學生民主參與到教學管理當中,從而充分的激發(fā)在校大學生的潛能。如果在校大學生真正能夠融入到高等院校的教學管理中,那么他們將會實現(xiàn)自我指揮與自我控制。在校大學生在多數(shù)情形下可以學會積極主動的去承擔他們應該承擔的責任,并且能夠?qū)?chuàng)造性與獨創(chuàng)性運用于高校的教學管理之中,同時還能夠?qū)⒆孕判闹饾u提高增強,實踐經(jīng)驗逐步的積累,這不但在管理能力、組織能力等方面得到很好的發(fā)揮與鍛煉,而且對他們學習成績的提高有極大的幫助。
3.6真正的體現(xiàn)了當前高等院校“以學生為本”的辦學理念。
(1)學業(yè)、生活、就業(yè)壓力。醫(yī)學是所有學科里最復雜的,醫(yī)學生學習負擔重、學制長、學費貴、家庭經(jīng)濟負擔重,加之經(jīng)濟體制轉(zhuǎn)軌和衛(wèi)生事業(yè)單位人事制度改革,高校招生規(guī)模擴大,醫(yī)學生就業(yè)前景不理想,其目標預期與現(xiàn)實相差懸殊,醫(yī)學教育投資成本與回報不成正比。
(2)惡劣的行醫(yī)環(huán)境。投資高、回報少、風險高已成為當下醫(yī)療行業(yè)的特征。近年來,我國醫(yī)患關系緊張,醫(yī)患矛盾突出,暴力傷醫(yī)等惡性事件頻頻上演,對當代醫(yī)務工作者和醫(yī)學生心理狀態(tài)都有惡劣影響,使部分醫(yī)學生對從醫(yī)產(chǎn)生動搖,醫(yī)學院校報考人數(shù)減少,醫(yī)學人才流失,影響了醫(yī)學的進步與發(fā)展[4]。
(3)社會經(jīng)濟體制改革。隨著改革開放的深入,社會主義商品經(jīng)濟對醫(yī)德教育產(chǎn)生積極和消極的雙重影響。一方面,商品經(jīng)濟使人們更注重效率、競爭、創(chuàng)新等,新一代醫(yī)學生自我意識突出,自我表現(xiàn)欲望強烈,富有進取精神,勇于拋棄舊習,對醫(yī)德教育具有積極意義;另一方面,商品經(jīng)濟追求利潤、重視價值的特點,必然滋長人們追求金錢等物質(zhì)利益的風氣,在醫(yī)德醫(yī)風上表現(xiàn)為亂收費、收紅包,醫(yī)務人員責任心、事業(yè)心和榮譽感淡漠。
二、新形勢下加強醫(yī)學生人文素質(zhì)和職業(yè)道德教育的策略
2.1加強師資隊伍建設
在教學中,教師是主導,素質(zhì)優(yōu)良的師資隊伍是醫(yī)學院校人文素質(zhì)教育取得成功的關鍵。學校應組建優(yōu)質(zhì)的人文社科類教師隊伍,提高全體教職員工的人文素質(zhì)和職業(yè)道德水平。加強對輔導員隊伍的愛崗敬業(yè)教育,使他們熱愛本職工作,致力于高校學生思想政治教育。
2.2用滲透法培養(yǎng)醫(yī)學生職業(yè)道德
堅持育人為本、德育為先的思想,在提高“智育”的同時,更注重醫(yī)學生道德品質(zhì)培養(yǎng)。除開設專門的人文理論課外,專業(yè)課教師在教授各科專業(yè)知識的同時,應適時進行人文知識、德育滲透,逐漸培養(yǎng)學生的社會公德、行為規(guī)范意識,讓學生形成做人做事的基本準則,加強學生勞動觀念、職業(yè)意識、敬業(yè)精神、職業(yè)紀律與責任感教育,從而實現(xiàn)教書與育人的完美結(jié)合。臨床教學中采取醫(yī)德理論教育和醫(yī)德實踐教育相結(jié)合的形式,積極引入啟發(fā)式、研究式、問題式[5]等教學方法。醫(yī)學是一門實踐科學,在醫(yī)學生臨床見習和實習時,教師可以根據(jù)臨床實際案例啟發(fā)學生分析醫(yī)德原則,引導學生自主應用醫(yī)德原則、選擇醫(yī)德規(guī)范,促進學生醫(yī)德修養(yǎng)的自我培育。此外,臨床見習及實習帶教教師還應不斷提高自身文化素質(zhì)和思想道德水平,利用自身人格魅力,發(fā)揮榜樣作用,以良好的思想政治素質(zhì)和道德風范潛移默化地影響學生[6]。面對工作中的不良風氣、紛繁的醫(yī)療糾紛和不合理的待遇等,引導學生用辯證發(fā)展和實事求是的觀點看待問題,正確評價社會。
2.3重視醫(yī)學生心理素質(zhì)及醫(yī)患溝通能力培養(yǎng)
面對充滿競爭和機遇的社會以及未知的前程,醫(yī)學生會感到壓力重重,焦慮、抑郁、無助、恐懼、迷茫等情緒滋生。學校應幫助學生克服畏難情緒,必要時開設心理咨詢課程,提供就業(yè)指導,幫助學生建立健康的學習心態(tài),順利完成由醫(yī)學生向醫(yī)生的轉(zhuǎn)變。面對醫(yī)患關系緊張,學校要重視醫(yī)學生醫(yī)患溝通能力培養(yǎng),開設醫(yī)患溝通藝術等課程,并在臨床技能課中強化醫(yī)患溝通技能訓練。增強醫(yī)學生的法律意識,依法行醫(yī),防范醫(yī)療糾紛,學會合理保護自己。
2.4發(fā)揮第二課堂的重要作用
醫(yī)學生人文素質(zhì)和職業(yè)道德教育不僅需要課堂上的滲透,更依賴于良好的校園氛圍。學校應營造良好的人文氛圍,通過校園德育文化熏陶,引導學生樹立正確的人生觀、世界觀、價值觀、榮辱觀。如定期開展愛國主義、集體主義教育,在實踐教學中適時灌輸白求恩的國際人道主義精神和南丁格爾的護理精神;結(jié)合醫(yī)療行業(yè)近期熱點問題展開教育活動,討論學習先進人物事跡,例如“抗擊非典”“5·12汶川地震”等事件,都讓我們看到了眾多醫(yī)務工作者的無私奉獻精神;充分利用圖書館、校園網(wǎng)資源平臺,創(chuàng)建豐富多彩的人文知識學習環(huán)境,并定期舉辦人文知識競賽、座談會或以問卷調(diào)查形式了解醫(yī)學生思想狀況和德育教學情況。將人文素質(zhì)納入考核評價體系,將學生德育成績與獎學金掛鉤,鼓勵醫(yī)學生積極參與公益性活動,在親身實踐中體會醫(yī)學事業(yè)的神圣,激發(fā)其從事醫(yī)療工作的責任感和事業(yè)心。
三、小結(jié)
1.1高職醫(yī)學生信息素養(yǎng)不高
目前,在校的高職醫(yī)學生多出生在20世紀90年代,接受新生事物能力較強,但與在校醫(yī)學本科生相比,文化素質(zhì)相對不高,直接制約著信息素養(yǎng)的形成與提高。另外,由于目前高職院校的信息素養(yǎng)教育多以文獻檢索課形式進行,往往只開設一學期,只能傳授一些最基本的檢索知識和檢索工具的使用方法。課程結(jié)束以后,學生往往最多只能掌握一些基本軟件的操作和一些基本信息工具的使用方法,導致高職醫(yī)學生的信息素養(yǎng)普遍不高。具體體現(xiàn)在以下兩個方面:一是信息意識不強。目前高職醫(yī)學生獲取信息的來源主要是教材、報刊、廣播、電視等傳統(tǒng)媒體以及微博、論壇、微信等新興網(wǎng)絡媒體。由于當前信息素養(yǎng)課的教學缺陷,高職醫(yī)學生還沒有養(yǎng)成自覺利用網(wǎng)絡來搜集和利用信息的習慣,上網(wǎng)獲取信息具有很大的隨意性和無目的性,多是以消遣和娛樂為主。而通過傳統(tǒng)媒體獲得的信息往往具有一定的滯后性,不能及時滿足學生的需求。因此,高職醫(yī)學生主動通過網(wǎng)絡獲取專業(yè)信息意識的不足,制約了他們專業(yè)素養(yǎng)和專業(yè)技能的提高。二是信息能力不足。當前,高校的文獻檢索課教學側(cè)重點在于基本文獻檢索知識介紹和基本檢索工具的使用,而利用最新的信息技術和信息工具解決實際問題的能力得不到真正的提高,導致學生在今后的學習過程中不能準確加工和利用信息。
1.2信息素養(yǎng)教師自身條件影響信息素養(yǎng)教育開展
目前,高職醫(yī)學院校的信息素養(yǎng)教育課程多由圖書館具有長期參考咨詢經(jīng)驗的資深館員兼職任教,專職教師較少,且在教學中一般注重檢索理論的傳授。但由于缺乏醫(yī)學專業(yè)背景,使得信息素養(yǎng)教育課程缺乏針對性,理論與實踐脫節(jié),信息素養(yǎng)教育課程游離于醫(yī)學專業(yè)課程教學之外。
1.3教學內(nèi)容局限和配套資源不完善制約信息素養(yǎng)教育發(fā)展
由于高職醫(yī)學院校所用信息素養(yǎng)教育教材各自為政,多以“文獻檢索”“信息檢索”為題,教學內(nèi)容仍然以文獻檢索與利用為主,很少涉及信息素養(yǎng)教育,因此教學內(nèi)容相對陳舊,不能緊跟信息技術發(fā)展步伐。同時,各院校所采用教材缺乏專業(yè)性和層次性,在教學內(nèi)容設置上也不能充分考慮醫(yī)學特色,而且同一學校不同專業(yè)、不同年級學生使用相同的教材。另外在配套資源方面,由于客觀條件所限,高職醫(yī)學院校電子資源發(fā)展不均衡,各校購買中文數(shù)據(jù)庫較多、外文數(shù)據(jù)庫偏少,循證醫(yī)學、引文數(shù)據(jù)庫更少。相對本科院校,學生上機實踐課時較少,不能充分滿足學生上機實習的需求。
2提高高職醫(yī)學生信息素養(yǎng)的措施
2.1轉(zhuǎn)變師生對信息素養(yǎng)教育觀念
由于信息素養(yǎng)教育課程在開設之初就是以文獻檢索課面目出現(xiàn),而信息素養(yǎng)教育等同于文獻檢索課的誤解在廣大師生頭腦中已經(jīng)根深蒂固。但兩者的教學本質(zhì)卻完全不同,信息素養(yǎng)教育注重培養(yǎng)學生的搜集、整理、利用、分析與生產(chǎn)信息的能力,因此是一種能力教育;而文獻檢索課側(cè)重于培養(yǎng)學生的搜集和整理文獻的能力,因此是一種資源教育。高職醫(yī)學院校圖書館應該加大信息素養(yǎng)教育宣傳力度,使廣大師生明確兩者的異同,轉(zhuǎn)變觀念,并進行相應的教學目標和教學內(nèi)容改革,使信息素養(yǎng)教育嵌入到專業(yè)課程學習中。
2.2完善教學內(nèi)容和配套資源建設
信息化時代的醫(yī)學科技日新月異,陳舊的文獻檢索教材和落后的配套資源建設越來越不能滿足信息素養(yǎng)教學要求,因此,高職醫(yī)學院校應努力做到以下幾點:一是鼓勵信息素養(yǎng)教師積極編制紙質(zhì)版、CAI課件、網(wǎng)絡版多種形式的教材,以滿足不同年級、不同專業(yè)學生的需求。教材編寫要有針對性,體現(xiàn)專業(yè)特色,重點介紹本專業(yè)的信息源及其特點和質(zhì)量,以及本專業(yè)信息獲取、整理、評價的特殊性等。二是圖書館應加強實體和虛擬館藏建設,不僅要根據(jù)學科專業(yè)的教學科研需要,購置學科專業(yè)所需的紙質(zhì)文獻資料,還要通過購買網(wǎng)絡版數(shù)據(jù)庫、自建專業(yè)特色數(shù)據(jù)庫、組建專題化虛擬館藏,以滿足不同層次、不同專業(yè)師生的需求。三是重視實踐環(huán)境建設,不僅要通過強化電子閱覽室建設,解決學生上機實踐要求,還要通過構建書目檢索終端、移動圖書館、電子書借閱機等,為學生營造良好的信息素養(yǎng)教育實踐環(huán)境。
2.3加強多元化師資隊伍建設
目前,高職醫(yī)學院校信息素養(yǎng)教育師資隊伍多由圖書館資深館員組成,但由于他們的醫(yī)學專業(yè)背景不足,制約了信息素養(yǎng)教育融入到學生專業(yè)課程學習中去。為改變這一局面,必須構建多元化師資隊伍。首先,圖書館信息素養(yǎng)教學教師要加強醫(yī)學專業(yè)知識的學習,而圖書館也應為他們多提供與本院專業(yè)教師或兄弟院校同行交流、學習的機會,提升他們自身的素質(zhì)和業(yè)務水平。其次,積極引進醫(yī)學專業(yè)教師進入信息素養(yǎng)教育師資隊伍,使信息素養(yǎng)教學更好地嵌入到專業(yè)課程學習中,使其向?qū)I(yè)性、學科性發(fā)展。而信息素養(yǎng)教育師資隊伍多元化發(fā)展,一方面可以使師資隊伍形成專業(yè)的知識結(jié)構,另一方面可以讓信息素養(yǎng)教學更好地融入到專業(yè)課教學中,學以致用,激發(fā)學生對信息素養(yǎng)課程的學習熱情。
2.4構建多層次多形式信息素養(yǎng)教育體系
根據(jù)不同專業(yè)、不同層次教學對象的教學需要,信息素養(yǎng)教育應該構建多層次、多形式的立體式教學體系??v向上,針對不同年級大學生由下至上依次提供基礎信息素養(yǎng)教育(針對大一新生,提供有關基礎圖書館應用技能和基礎信息技術應用技能的培訓)、通用信息素養(yǎng)教育(針對大二學生,提供學術與日常生活問題信息的檢索、評價能力培訓)、專業(yè)信息素養(yǎng)教育(針對大三學生,提供基于相關專業(yè)的專門信息素養(yǎng)知識和技能培訓);橫向上,采用以課堂教學為主,第二課堂(入館教育、讀者培訓、講座培訓等)、第三課堂(科研實驗、社會實踐、臨床實踐等)、在線信息素養(yǎng)教育為輔的教學模式。課堂教學是實施信息素養(yǎng)教育的主體,第二、三課堂及在線信息素養(yǎng)教育,既是正規(guī)課堂教學的有利補充,也是課堂教學成果的充分檢驗。
3結(jié)語
ExpressionandbiologicalactivityofmouseWnt3ageneinNIH3T3cells
【Abstract】AIM:ToexpressrecombinantmouseWnt3asignalproteinwithbiologicalactivity.METHODS:Therecombinanteukaryoticexpressionplasmid,pSecTag2/HygroBWnt3a,wastransfectedintoNIH3T3cellsbyliposome,thentheexpressedproteinwasdetectedbyWesternBlot.ThesaturationdensityandthecapabilityofsuppressingapoptosisinWnt3a/NIH3T3cellswereevaluated.RESULTS:TheWnt3asignalproteinwasstablyexpressedinWnt3a/NIH3T3cells.ThesaturationdensityandthecapabilityofsuppressingapoptosisinWnt3a/NIH3T3cellsweremarkedlyincreased.CONCLOUSION:WesuccessfullyconstructtherecombinantWnt3asignalproteinwithbiologicalactivity.
【Keywords】Wnt3a;eukaryoticexpression;contactinhibition;apoptosis
【摘要】目的:表達具備生物活性的重組小鼠Wnt3a信號蛋白.方法:應用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑將重組真核表達載體pSecTag2/HygroBWnt3a轉(zhuǎn)染并篩選穩(wěn)定表達的NIH3T3細胞,WesternBlot鑒定重組Wnt3a蛋白的表達,并對Wnt3a/NIH3T3細胞的融合密度及抗凋亡能力給予檢測.結(jié)果:Wnt3a信號蛋白在Wnt3a/NIH3T3細胞中獲得穩(wěn)定表達,Wnt3a信號蛋白能夠明顯提高NIH3T3細胞的融合密度及抗凋亡能力.結(jié)論:在NIH3T3細胞中表達的重組Wnt3a信號蛋白具備生物活性.
【關鍵詞】Wnt3a;真核表達;接觸抑制;細胞凋亡
0引言
小鼠Wnt3a基因是Wnt基因家族中的重要成員,其編碼表達Wnt3a信號蛋白.Wnt3a信號蛋白可以激活經(jīng)典的Wnt/βcatenin信號通路.Wnt3a信號蛋白對神經(jīng)干細胞表現(xiàn)出明顯的促神經(jīng)元分化的作用.我們應用基因重組的方法,從小鼠胚腦中克隆Wnt3acDNA,構建真核表達載體,通過陽離子脂質(zhì)體試劑將目的基因?qū)隢IH3T3細胞中,建立穩(wěn)定表達Wnt3a信號蛋白的NIH3T3細胞株,并對其生物學活性進行初步分析.
1材料和方法
1.1材料真核表達載體pSecTag2/HygroBWnt3a由本研究室構建.NIH3T3細胞株由安徽醫(yī)科大學病理教研室吳強教授惠贈.多聚賴氨酸購自博士德公司;胎牛血清及DMEM購自Gibco公司.潮霉素及LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒、購自Invitrogen公司.質(zhì)粒小量提取試劑盒WizardPlusSVMiniprepsDNAPurificationsystem,ReverseTranscriptionSystemRTPCR試劑盒購自Promega公司;鼠抗mycmAb、鼠抗βcateninmAb購自SantaCruz公司,F(xiàn)ITC標記的兔抗鼠二抗、TRITC標記的兔抗鼠二抗購自北京中山公司;臺盼藍購自sigma公司.其他試劑均為進口分裝或國產(chǎn)分析純.
1.2方法
1.2.1NIH3T3細胞的培養(yǎng)將凍存的NIH3T3細胞復蘇后用含100g/L的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,在37℃50mL/LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),3d換液1次,傳代3至4次使細胞達到良好的生長狀態(tài).
1.2.2NIH3T3細胞的轉(zhuǎn)染按LipofectamineTM2000試劑說明書操作進行.轉(zhuǎn)染前24h用胰蛋白酶消化貼壁的NIH3T3細胞,再以無血清及無雙抗的DMEM培養(yǎng)基重懸,并按1×105的細胞密度接種于6孔培養(yǎng)板,培養(yǎng)24h后,當細胞生長至85%~90%融合度時,取純化的重組質(zhì)粒pSecTag2/HygroBWnt3a2μg,溶于250μL無血清的DMEM培養(yǎng)基中,得到A液.取3μLLipofectamineTM2000加于97μL無血清的DMEM培養(yǎng)基中,得到B液.將A,B液混勻,室溫放置30min后加入0.8mL含100g/L胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基,輕輕混勻,均勻滴加于經(jīng)無血清培養(yǎng)基洗滌的貼壁細胞表面,于37℃50mL/LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h.棄去轉(zhuǎn)染液,加2mL完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng).轉(zhuǎn)染后48h,待細胞生長至接近融合時收集上清,并按1∶3的密度傳代.繼續(xù)培養(yǎng)至細胞密度達50%~70%.棄去培養(yǎng)液,更換濃度為600mg/L的潮霉素培養(yǎng)液進行篩選.轉(zhuǎn)染時,設置轉(zhuǎn)染空載體pSecTag2/HygroB的組和正常細胞陰性對照組.約14d后,可見有陽性克隆形成,繼續(xù)擴增培養(yǎng).穩(wěn)定表達Wnt3a蛋白的細胞株命名為Wnt3a/NIH3T3(W/3T3),轉(zhuǎn)染空載體的細胞株命名為empty/NIH3T3(E/3T3),正常細胞陰性對照組命名為control/NIH3T3(C/3T3).
1.2.3重組Wnt3a蛋白鑒定轉(zhuǎn)染48h后,分別收集C/3T3,E/3T3和W/3T3細胞各約1×106及其培養(yǎng)上清液.以SDS煮沸法裂解細胞并收集上清,并將其與細胞培養(yǎng)上清液真空冷凍干燥,濃縮至1/2體積,以鼠抗mycmAb為一抗,HRP標記的山羊抗兔IgG為二抗,使用WesternBlot方法行重組Wnt3a蛋白的鑒定.
1.2.4βcatenin的表達鑒定分別在轉(zhuǎn)染后6,12,24h收集W/3T3,E/3T3及C/3T3細胞各約1×106,以SDS煮沸法裂解細胞并收集上清,以鼠抗βcateninmAb為一抗,HRP標記的山羊抗兔IgG為二抗,使用WesternBlot方法進行鑒定.
1.2.5Wnt3a/NIH3T3細胞增殖特性的鑒定以密度約1×105接種W/3T3,E/3T3及C/3T3細胞于24孔培養(yǎng)板,隔日觀察,臺盼藍染色并使用血細胞計數(shù)板計數(shù)活細胞.
1.2.6Wnt3a/NIH3T3細胞抗凋亡實驗以密度約1×105接種W/3T3,E/3T3及C/3T3細胞于24孔培養(yǎng)板,24h后臺盼藍染色并使用血細胞計數(shù)板計數(shù)活細胞數(shù),同時更換含10g/L胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,定時觀察并臺盼藍染色并使用血細胞計數(shù)板計數(shù)活細胞,計算存活細胞與原始細胞數(shù)的比值.
統(tǒng)計學處理:用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析.
2結(jié)果
2.1重組Wnt3a蛋白在的NIH3T3細胞中獲得表達WesternBlot鑒定發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt3a基因的NIH3T3細胞裂解液中有一Mr約為45×103的特異性條帶,在轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt3a基因的NIH3T3細胞培養(yǎng)上清液、E/3T3及C/3T3細胞裂解液和細胞培養(yǎng)上清液中,均未發(fā)現(xiàn)相應條帶(圖1).
1:W/3T3組細胞裂解液;2:W/3T3組細胞培養(yǎng)上清液;3:E/3T3組細胞裂解液;4:C/3T3組細胞裂解液.
圖1WestemBlot鑒定Wnt3a信號蛋白的表達(略)
2.2Wnt3a/NIH3T3細胞中βcatenin的表達上調(diào)對Wnt信號通路中的重要信息分子βcatenin的表達情況進行WesternBlot鑒定,在Mr約90×103處出現(xiàn)特異性條帶(圖2),但無時間依賴性.
1~3:培養(yǎng)6,12,24h.
圖2各實驗組βcatenin表達(略)
2.3Wnt3a/NIH3T3細胞融合密度明顯增高經(jīng)臺盼藍染色計數(shù)活細胞,以密度約1×105接種的E/3T3及C/3T3細胞3d后生長至融合密度,此時細胞融合密度約4.6×105,但W/3T3細胞繼續(xù)生長至第6d,細胞融合密度約13×105,與另外兩組相比,W/3T3細胞融合密度明顯增高(P<0.01)(圖3,4).
A:W/3T3;B:E/3T3;C:C/3T3.
圖3各實驗組細胞融合密度觀察(倒置×100)(略)
2.4W/3T3細胞抗凋亡能力明顯增高經(jīng)臺盼藍染色計數(shù)活細胞,更換含10g/L胎牛血清的培養(yǎng)液48h后,E/3T3及C/3T3細胞大量凋亡,細胞數(shù)明顯減少,但W/3T3細胞數(shù)無明顯減少,抗凋亡能力明顯提高(P<0.01)(圖5,6).
圖4實驗組細胞數(shù)變化(略)
A:W/3T3;B:E/3T3;C:C/3T3.
圖5各實驗組細胞抗凋亡能力觀察(倒置×100)(略)
圖6實驗組存活細胞比例(略)
3討論
Wnt信號蛋白為含有23~24個保守型半胱氨酸殘基,在人類的基因組中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Wnt基因19種[1-2].Wnt3a是Wnt基因家族的重要成員,其基因早在1992年就已經(jīng)被發(fā)現(xiàn),而且多種的真核細胞被用于它的表達,但由于其低溶解度及疏水性等特點,一直未能純化出具備生物活性的Wnt3a信號蛋白.1998年,Shibamoto等[3]使用L細胞(鼠胸腺激酶缺陷細胞株;LMTK)作為表達細胞時,在培養(yǎng)上清中發(fā)現(xiàn)了大量具備生物活性的Wnt3a蛋白,約400μg/L.Willert等[4]所純化的Wnt3a信號蛋白通過激活Wnt信號通路促使骨髓中的造血干細胞分裂和自我復制,認為Wnt可能在一系列組織的自我更新中起信號作用.
βcatenin是經(jīng)典的Wnt/βcatenin信號通路中重要的信息分子[5],其在Wnt信號通路關閉的情況下,βcatenin被磷酸化而迅速降解.Wnt信號通路被激活后,βcatenin在胞內(nèi)大量聚集,并進入細胞核,啟動下游靶基因的轉(zhuǎn)錄,產(chǎn)生生物學效應.βcatenin表達的明顯上調(diào)代表Wnt信號通路被激活.實驗中WesternBlot鑒定發(fā)現(xiàn)βcatenin表達明顯上調(diào),但沒有發(fā)現(xiàn)與時間有依賴關系.實驗中表達的重組Wnt3a信號蛋白帶有myc標簽,Burrus等[6]認為如果Wnt3a信號蛋白帶有標簽將影響其活性,甚至失活.但同樣有文獻[7,8]中應用的Wnt3a信號蛋白帶有myc,HA等標簽,而且文獻中對其活性同樣做了詳細的描述.本實驗夠構建的重組Wnt3a信號蛋白具備生物學活性,但未能與野生型(wildtype)Wnt3a信號蛋白活性做詳細的比較,其生物學活性的變化有待進一步分析.
Wnt3a蛋白可以促進神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元分化.在使用含有Wnt3a信號蛋白的條件培養(yǎng)液培養(yǎng)E11.5d的胎鼠前腦神經(jīng)干細胞發(fā)現(xiàn),神經(jīng)干細胞大量分化成為MAP2陽性的神經(jīng)元.去除Wnt3a信號蛋白后,神經(jīng)干細胞恢復增殖能力,而且當條件培養(yǎng)液中的FGF2去除后,分化的神經(jīng)元形態(tài)更為成熟[8-9].來源于小鼠大腦皮質(zhì)的神經(jīng)干細胞轉(zhuǎn)基因后超表達Wnt信號蛋白,即使在培養(yǎng)液中加入FGF2,依然大量向神經(jīng)元分化,但阻斷Wnt信號通路后神經(jīng)元的分化被抑制[10].
Wnt信號通路的生物學作用十分復雜,不同的Wnt基因,不同的細胞,甚至不同的細胞狀態(tài)都有可能產(chǎn)生不同的作用[11].在本實驗中我們采用pSecTag2/HygroBWnt3a真核表達載體,NIH3T3細胞作為表達細胞,成功表達重組Wnt3a信號蛋白,初步探討了Wnt3a信號蛋白的生物學活性,為進一步建立用于以治療為目的的分子移植的方法奠定基礎.
【參考文獻】
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1.感恩品質(zhì)各因子總體情況
本研究所采用的量表為五點量表,得分越高表示感恩品質(zhì)水平更高,為了考查學院學生感恩品質(zhì)的整體情況,本調(diào)研選取各因子間均值進行了對比,從各因子均值分布情況來看,學生感恩品質(zhì)總體情況良好,各因子的均值都在3以上。其中,均值最大的因子是感恩父母,最小的是虧欠感。就感恩品質(zhì)的內(nèi)容而言,相比之下,表現(xiàn)較弱的依次為報恩、記恩、施恩、虧欠感四個因子。而在感恩對象上,對于父母的感恩程度明顯高于對老師的感恩。從各因子均值來看,醫(yī)學生感恩品質(zhì)的總體情況是比較好的,但從各因子均值的分布情況可看出,識恩的均值要高于報恩、記恩、施恩的均值。這說明,學生可以感知到他人給予的恩惠,但在報恩、記恩、施恩等外在的行為與其其因在的感知并沒有形成一致,還存在“重體驗、輕行動”的情況。
2.感恩品質(zhì)在年級上的差異
不同年級的學生在報恩、感恩父母、珍惜感、施恩四個因子上存在顯著差異。通過多重比較,我們發(fā)現(xiàn),在四個因子上的得分,低年級與高年級之間存在較大差別,高年級明顯高于低年級。首先,隨著年級的增長,高年級學生的交際范圍及交往深度都在不斷增長,他們可能會接受更多的他人給予的恩惠,對于他人的恩惠的理解也更加深刻,對人際關系的理解也更深刻。這也包括對來自父母的恩惠的感知與理解,隨著成長,高年級學生表現(xiàn)出更多的感恩體驗。此外,高年級學生離畢業(yè)、就業(yè)等關鍵時刻越近,心理壓力也越大,會更加珍惜當下所擁有的一切,珍惜來自父母、老師、同學的恩惠。其次,高年級學生比新生更多的參加了社會實踐活動和志愿服務,在自身能力不斷提高的同時,會得到感恩實踐的滿足感和自豪感,這也是高年級學生在報恩、施恩兩個因子上得分較高的原因之一。
二、醫(yī)學生感恩教育存在的問題
近幾年來,各高校廣泛開展感恩教育,對增強大學生的感恩意識,提升其思想道德水平起到了一定的作用。然而在高校目前的教育體系中還存在諸多問題。
1.感恩教育的實施較為滯后:
首先,在感恩教育的課程設置方面,感恩教育的課程設置內(nèi)容單一。對感恩教育還常常只是停留在理論認識的層面,不能從淺到深對道德進行認識,沒有明確的針對性,沒有根據(jù)學生各種不同學習階段的特點,沒有結(jié)合時代特征對課程本身進行完善。其次,感恩教育的方式方法不夠豐富。感恩教育較多的還是采用老師說教的方法來進行。有些學校嘗試了一些靈活多樣的方式進行感恩教育,比如組織觀看感恩影片,結(jié)合醫(yī)生的光輝事跡的討論等,但還沒有系統(tǒng)的課程設置,能夠發(fā)揮手機、網(wǎng)絡等新興媒體資源進行感恩教育的,更是少之又少。
2.感恩教育的師資素質(zhì)參差不齊:
在醫(yī)學院校,負責醫(yī)學生感恩教育的師資隊伍有幾種類型,一是德育課老師,二是學生工作管理人員,三是其他專業(yè)任課老師,還有就是輔導員。在這樣一種復雜的構成之中,教師的素質(zhì)和學歷各有差別。一些教師的知識結(jié)構單一,方式方法簡單,能結(jié)合各種學科跨專業(yè)并綜合運用的教師,則更為缺少。因所受教育層次的不同,教師在自身的道德修養(yǎng)方面也有較大的差異。部分輔導員和學生工作干部,感恩意識本來就不強,更達不到感恩教育的標準和要求。目前,在醫(yī)學院中,既有專業(yè)的醫(yī)學知識,同時有感恩意識,又能很好的將專業(yè)知識和道德感化結(jié)合起來的教師并不多,這對于感恩教育來說是一個較大的缺憾。
3.感恩教育制度和評估體系不足:
道德行為的基本特征是自知和自覺,是行為主體的自愿選擇,但任何道德規(guī)范又離不開他律。醫(yī)學生學習的他律性必須運用制度規(guī)范來強化,建立完整、合理的考核評估制度,才能使學生將所學的職業(yè)道德的基本理論和專業(yè)知識轉(zhuǎn)化為真正的醫(yī)學行為,醫(yī)學生的感恩教育才能盡快奏效。但一般醫(yī)學院校的感恩教育缺乏常態(tài)化、制度化,同時也缺乏相應的考核制度、考核標準,沒有一個完善的評估體系。學生的感恩意識和行為不能被很好的記錄和評估,感恩教育和感恩的實施就成為一種空談。有些醫(yī)學生表面上說得冠冕堂皇,實際很難做到言行合一;有些學生本來有比較高的道德內(nèi)省意識,但當他們看到忘恩負義的人并沒有受到相應的懲罰時,就有可能動搖原有的感恩責任意識,甚至放棄對他人的感恩。
4.感恩教育對象的倫理思想準備不足:
根據(jù)調(diào)查,很多醫(yī)學生學醫(yī)并非出自本意,而是因為父母看到目前醫(yī)生的社會地位比較高,收入可觀等,而本人并不理解學醫(yī)的艱苦性,也沒有做好為社會奉獻個人利益的思想準備。90后的醫(yī)學生多數(shù)是獨生子女,他們即使有較好的學習動機,但是缺乏吃苦耐勞的精神。有些學生希望盡快獨立,但是對父母卻有很強的依賴性,導致自己的目標和計劃不能盡快的實施,還有不少學生的人際交往也有待提高。在社會拜金主義盛行的環(huán)境下,部分學生將金錢利益看成是奮斗的主要目標,激進功利的思想在醫(yī)學生當中也有一定的市場。在應試教育的大背景下,即使努力提倡素質(zhì)教育,但學生進入大學的標準仍然在很大程度上依賴于成績,以至道德培育、素質(zhì)教育有時僅僅是一句口號。
三、加強醫(yī)學生感恩教育的對策建議
高等醫(yī)學教育是高等教育的重要組成部分,肩負著培養(yǎng)醫(yī)學人才、維護和促進人類健康的重要使命。面對21世紀的需要,世界各國的共識是,具有綜合素質(zhì)的、全面發(fā)展的醫(yī)生,才能稱得上合格的醫(yī)學人才。高等醫(yī)學院校不僅要注重培養(yǎng)學生的專業(yè)知識,更要培養(yǎng)學生的道德素養(yǎng),這是醫(yī)學類高校人才培養(yǎng)的核心任務,也是高校生命力和發(fā)展力的關鍵所在。
1.創(chuàng)新教育方法,提高感恩教育實效:
要推進學校感恩教育的科學化,首先就應該改變過去固有的教育模式,注重教育與學生的個體作用相結(jié)合,注重拓展學生的個人思維,從而幫助自己感恩責任意識的培養(yǎng)。除了過去的教學模式外,要多運用現(xiàn)代科技手段,網(wǎng)絡、QQ、微信微博討論會等方式,最大程度上調(diào)動學生的積極性。在教學方式上,要優(yōu)化醫(yī)德教育手段與方法。感恩責任教育應重在以情“感”人、以理“服”人、以身教“動”人。教學中應堅持以正確的醫(yī)德輿論引導人,以高尚的醫(yī)德品格及思想理論塑造人,以優(yōu)秀的醫(yī)藥衛(wèi)生“先?!比宋锕奈枞?。采取課堂講授、視像教學、案例分析、講座演講、專題討論或辯論、帶問題進行的社區(qū)醫(yī)院實踐及社會醫(yī)學服務等雙向或多向式綜合型教學方法,以提高教學的時效性、知行統(tǒng)一性、理論與實際相結(jié)合性。
2.完善課程設置,加強醫(yī)患關系課程:
加強醫(yī)患之間的溝通和聯(lián)系,首先應該注重實習前教育。在校期間,醫(yī)學生接受了感恩教育并掌握了醫(yī)德理論,但是隨著時間的推移會淡忘,因此可以通過實習之前的再教育,讓醫(yī)學生重溫醫(yī)德和倫理知識,從而提升職業(yè)道德修養(yǎng)。其次,要在實踐中強化醫(yī)患溝通技巧。如通過模擬預演,使學生對醫(yī)學的實踐工作有更加深切的情感體會,從而激發(fā)學生的道德責任感。此外還要豐富第二課堂活動,強化醫(yī)患關系課程,將志愿者服務、社會實踐納入人才培養(yǎng)學分。在志愿活動中得到服務對象反饋的這種感情,可以促使醫(yī)學生產(chǎn)生強烈的社會責任感與道德感。社會實踐也為學生提供了傳授知識、傳播科學、傳播文化,展現(xiàn)自我風采的舞臺,醫(yī)學生們在自身素質(zhì)得到提高,取得良好的社會效益的同時,也進行了感恩社會、回報社會的感恩實踐。
3.加強隊伍建設,提升教育師資素質(zhì):
在感恩教育中,教師的力量是非常關鍵的?!坝焉频膽B(tài)度,善于理解和尊重學生,仁慈和寬容……”一個好教師的素質(zhì)和能力將直接影響感恩教育的實施效果,要讓醫(yī)學生學做“真人”,首先教師自己應該是一個“真人”。加強教師隊伍的建設,提升師資素質(zhì),加強醫(yī)學人文課程的實踐研究,對感恩教育來說至關重要。專職教師隊伍是感恩教育師資中最基礎的部分,加強德育專職師資的建設,是整個感恩教育師資中的基礎環(huán)節(jié)。學校應采取切實措施,做好人文教育隊伍的規(guī)劃、教育、培訓工作,關心、愛護并幫助解決教師的實際問題和困難,加強管理,形成健全的激勵和約束機制,努力建設一支信念堅定、業(yè)務精湛、素質(zhì)精良的人文德育專兼職教師隊伍。
4.規(guī)范評估體系,保證教育教學水平:
高校重視感恩教育,就要把感恩責任教育制度化、規(guī)范化、具體化,建立起一套考核醫(yī)學生感恩意識與行為的道德標準體系。學校對感恩教育的評估既要關注結(jié)果,又要關注方法,更要重視過程;既要強調(diào)終結(jié)性評估,又要強調(diào)診斷性評估,更要重視形成性評估;既要突出評估指標的多樣化,又要突出評估方法的多樣化,更要重視評估主體的多樣化。做到管理有人抓、研究有人搞、具體工作有人做。要分層次、分類型、多形式地開展?jié)u進性、階梯式的教育師資培訓。要對全體干部教師開展全員通識培訓,幫助廣大干部教師了解感恩教育的基本內(nèi)容和教育目標,能夠把感恩教育有機融入到實際的工作中去。此外,感恩研究還需要有效的研究工具,一份綜合考慮認知成份、情感成份和行為成份,具有良好結(jié)構效度、效標效度和信度的感恩特質(zhì)量表至關重要。
5.注重春風化雨,促進學生自覺實踐: