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臨床分子遺傳學(xué)范文第1篇

關(guān)鍵詞：Angelman綜合征；運(yùn)動(dòng)型腦癱；康復(fù)訓(xùn)練

1臨床資料

患兒男，2011年10月19日出生，現(xiàn)25個(gè)月，因不能獨(dú)坐、不會(huì)翻身、主動(dòng)抓物意識(shí)差于2012年6月26日就診，隨后開(kāi)始康復(fù)訓(xùn)練，迄今為止共做了4個(gè)療程，康復(fù)項(xiàng)目有PT、OT、理療、言語(yǔ)治療，3個(gè)月為1個(gè)療程，安排3次/w訓(xùn)練，OT為20 min，PT為30 min，言語(yǔ)為30 min，1個(gè)療程復(fù)評(píng)1次，根據(jù)患兒進(jìn)步情況重新制定新的治療處方。該患兒系G4P2，母孕39+1 w剖宮產(chǎn)娩出，出生體重3.55 Kg，否認(rèn)窒息搶救史，否認(rèn)病理性黃疸及抽搐史，母孕期有妊高征，患兒3月齡時(shí)曾患重度肺炎，患兒有一同母異父姐姐體健。患兒大運(yùn)動(dòng)發(fā)育落后，11個(gè)月會(huì)獨(dú)坐，18個(gè)月會(huì)腹爬，至今不會(huì)四點(diǎn)爬，扶物站立不穩(wěn)。雙手精細(xì)動(dòng)作發(fā)育落后：能拇食指對(duì)捏，但不會(huì)搭積木，不會(huì)拿筆亂畫(huà)。語(yǔ)言與認(rèn)知發(fā)育落后：15個(gè)月能認(rèn)生人，叫名字有反應(yīng)，18個(gè)月偶能發(fā)出"a、gege"的聲音，至今不會(huì)發(fā)"baba、mama" 音，認(rèn)知能力差，現(xiàn)能分辨生熟人，能聽(tīng)懂簡(jiǎn)單指令，不能完成復(fù)雜活動(dòng)。患兒1歲8個(gè)月時(shí)出現(xiàn)無(wú)熱驚厥，表現(xiàn)為肌陣攣發(fā)作，確診為癲癇，開(kāi)始口服抗癲癇藥物治療，調(diào)整抗癲癇藥物左乙拉西坦至250 mg/bid、丙戊酸鈉溶液4 mL/bid和氯硝西泮0.03 mg/qid，癲癇基本控制。查體：表情欣快，右眼斜視，身高正常，頭圍正常，心、肺、腹無(wú)明顯異常，四肢肌張力偏低，深淺感覺(jué)粗測(cè)均無(wú)異常，腱反射正常引出，不能獨(dú)走。實(shí)驗(yàn)室檢查：血、尿、便常規(guī)，血生化及心電圖未見(jiàn)明顯異常，視頻腦電圖：背景活動(dòng)明顯變慢；醒睡大量廣泛性和多灶棘波、棘慢波、多棘慢波陣發(fā)，前頭部著；醒睡監(jiān)測(cè)到肌陣攣持續(xù)狀態(tài)（清醒著）。頭顱MRI示三腦室偏飽滿。分子遺傳學(xué)檢測(cè)顯示：患兒染色體15q11PWS/AS相關(guān)區(qū)域基因的拷貝數(shù)缺失，為缺失型AS綜合征。

2康復(fù)訓(xùn)練情況

患兒于2012年6月26日首次就診，當(dāng)時(shí)8個(gè)月7 d，不會(huì)坐、不會(huì)翻身、主動(dòng)抓物意識(shí)差，Peabody評(píng)估結(jié)果為：粗大運(yùn)動(dòng)相當(dāng)月齡3～5個(gè)月，精細(xì)運(yùn)動(dòng)相當(dāng)月齡4～6個(gè)月，患兒運(yùn)動(dòng)能力落后。PT治療處方為：增加頭部控制訓(xùn)練（利用楔形墊或在四點(diǎn)支撐位下先訓(xùn)），翻身訓(xùn)練（用玩具誘發(fā)其主動(dòng)參與，同時(shí)治療師稍加輔助），增加肩胛骨、軀干、骨盆的分離運(yùn)動(dòng)，輔助坐位及仰臥位到坐位轉(zhuǎn)換訓(xùn)練，增加軀干控制能力。OT治療處方為：上肢各關(guān)節(jié)的擠壓，增加其本體感覺(jué)，加強(qiáng)主動(dòng)抓物訓(xùn)練（在中線位操作），四點(diǎn)支撐增加肩關(guān)節(jié)穩(wěn)定性及上肢負(fù)重訓(xùn)練。

患兒于2012年9月29日復(fù)評(píng)，11個(gè)月10 d，Peabody評(píng)估結(jié)果為：粗大運(yùn)動(dòng)相當(dāng)月齡7～9個(gè)月，精細(xì)運(yùn)動(dòng)相當(dāng)月齡6～8個(gè)月，可獨(dú)坐，軀干控制能力尚可，可主動(dòng)抓物，有一定模仿能力，現(xiàn)主要問(wèn)題為移動(dòng)能力差，不會(huì)爬，抓物姿勢(shì)以把抓為主，協(xié)調(diào)性差。PT治療處方為：加強(qiáng)坐位控制能力訓(xùn)練（加干擾誘發(fā)其左右及后方保護(hù)反射），移動(dòng)能力的訓(xùn)練：從坐位到四點(diǎn)位的轉(zhuǎn)換，腹爬訓(xùn)練。OT治療處方為：加強(qiáng)手眼協(xié)調(diào)，雙手操作訓(xùn)練，如插放木棒，對(duì)敲積木，加強(qiáng)三指抓、拇食指對(duì)捏訓(xùn)練。

在此治療時(shí)間，患兒經(jīng)常生病住院，康復(fù)訓(xùn)練有斷續(xù)，于2013年7月12日復(fù)評(píng)，20個(gè)月23 d，Peabody評(píng)估結(jié)果為：粗大運(yùn)動(dòng)相當(dāng)月齡8～12個(gè)月，精細(xì)運(yùn)動(dòng)相當(dāng)月齡10～11個(gè)月，象征性游戲測(cè)試：測(cè)試分?jǐn)?shù)為3，相當(dāng)年齡

在此治療期間患兒癲癇發(fā)作頻繁，康復(fù)訓(xùn)練暫停，在住院期間確診為Angelman 綜合征，癲癇藥物控制后康復(fù)訓(xùn)練繼續(xù)，于2013年11月27日復(fù)評(píng)，患兒25個(gè)月8d，Peabody評(píng)估結(jié)果為：粗大運(yùn)動(dòng)相當(dāng)月齡8～12個(gè)月，精細(xì)運(yùn)動(dòng)相當(dāng)月齡7～8個(gè)月，與之前相比患兒精細(xì)運(yùn)動(dòng)能力有退步，對(duì)外界刺激較敏感，有觸覺(jué)刺激和抵觸行為，主動(dòng)抓物意識(shí)差，與人眼神交流少。PT治療處方為：加強(qiáng)高跪、單跪、扶站訓(xùn)練（扶髖站立或利用梯背架），增加其下肢負(fù)重及髖關(guān)節(jié)控制能力訓(xùn)練，四點(diǎn)爬，促進(jìn)手腳分離運(yùn)動(dòng)及協(xié)調(diào)性、重心轉(zhuǎn)移能力訓(xùn)練。OT治療處方為：加強(qiáng)上肢各關(guān)節(jié)擠壓，增加其本體感覺(jué)及關(guān)節(jié)穩(wěn)定性，用刺球加強(qiáng)上肢觸覺(jué)刺激，抓放物品及換手訓(xùn)練。因患兒認(rèn)知能力差，故ST處方不變，仍需加強(qiáng)訓(xùn)練。

3討論

據(jù)報(bào)道，Angelman綜合征發(fā)病率約為1/12000～1/20000[1]，是一種相對(duì)少見(jiàn)的疾病，臨床癥狀多樣化，其診斷主要依靠特征的臨床表現(xiàn)、腦電圖和分子遺傳學(xué)檢查。由于早期患兒的表現(xiàn)不具有特異性，加上我們對(duì)AS的認(rèn)識(shí)不足，該病例早期曾被誤診為共濟(jì)失調(diào)型腦癱，直至患兒癲癇發(fā)作，進(jìn)一步檢查腦電圖和分子遺傳學(xué)檢查之后才被確診為AS[2]。根據(jù)患兒的分子遺傳學(xué)檢查報(bào)告，本病例患兒屬于母源染色體15q11.2-13微缺失型。有文獻(xiàn)報(bào)道15q11-13缺失型AS主要由于母源15q11-13新生缺失突變所致，再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)

參考文獻(xiàn)：

[1]白晉麗，宋，鄒麗萍，等.15q11-13缺失型Angelman綜合征17例遺傳學(xué)診斷及臨床特點(diǎn)[J].中華兒科雜志，2010，48（12）：939-943.

[2]劉立軍，白晉麗，瞿宇晉，等.Angelman綜合征的遺傳學(xué)診斷[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2009，26（5）：495-498.

臨床分子遺傳學(xué)范文第2篇

關(guān)鍵詞：全反式維甲酸；化療；NPM1陽(yáng)性；急性髓系白血??；臨床療效

急性髓系白血病（acute myeloid Leukemia，AML）是一組在臨床及細(xì)胞遺傳學(xué)上均具有高度異質(zhì)性的綜合征，其臨床主要特征是分子遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)遺傳引起的造血干、祖細(xì)胞的自我更新、增殖和分化異常。近年來(lái)越來(lái)越多的研究證實(shí)急性髓系白血病的預(yù)后情況和多參數(shù)指標(biāo)均有密切關(guān)系，其中最為突出的是骨髓細(xì)胞的染色體核型和分子基因的異常對(duì)預(yù)后的影響，目前國(guó)際上已經(jīng)把FLT3基因突變作為評(píng)判急性髓系白血病預(yù)后的危險(xiǎn)分層的重要指標(biāo)。NPM1基因突變是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的AML中最為常見(jiàn)的II類(lèi)基因突變，其發(fā)病率高達(dá)25%～35%，在正常核型AML中發(fā)生率達(dá)到55%～65%。目前，NPM1基因已成為具有評(píng)估預(yù)后價(jià)值的分子標(biāo)記物，特別是其在正常核型AML患者中的意義，已得到公認(rèn)。臨床上對(duì)于NPM1陽(yáng)性的急性髓系白血病更多的以化療為主，該方法雖然能緩解臨床癥狀，但是治療并發(fā)癥發(fā)生率較高，死亡率較高。近年來(lái)，全反式維甲酸聯(lián)合化療在NPM1陽(yáng)性的急性髓系白血病患者中得到應(yīng)用，且效果理想。為了探討全反式維甲酸聯(lián)合化療在NPM1陽(yáng)性的急性髓系白血病患者中的臨床療效，選取2014年12月～2016年2月醫(yī)院診治的20例NPM1陽(yáng)性的急性髓系白血病患者資料進(jìn)行分析，報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2014年12月～2016年3月醫(yī)院診治的20例NPM1陽(yáng)性的急性髓系白血病患者資料進(jìn)行分析，將患者根據(jù)隨機(jī)數(shù)字方法分為試驗(yàn)組和對(duì)照組。試驗(yàn)組10例，男6例，女4例，年齡15～69歲，平均（42.5±25.5）歲，病程1～10月，平均（4.2±3.4）月；對(duì)照組10例，男5例，女5例，年齡15～69歲，平均（36.5±20.5）歲，病程1～10月，平均（3.2±1.9）月。入選患者均符合NPM1陽(yáng)性的急性髓系白血病臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)?；颊邔?duì)診斷方法、試驗(yàn)方案等具有知情同意權(quán)，且自愿簽署知情同意書(shū)，患者臨床資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2治療方法 兩組患者治療過(guò)程中根據(jù)病情給予成分輸液、補(bǔ)充血小板、小劑量肝素靜脈滴注。對(duì)照組采用化療方案治療方法：根據(jù)患者年齡情況，一般體能狀況分層按CAMLG2010和CAMLE2010方案實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)化療；試驗(yàn)組在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合全反式維甲酸治療方法：自化療當(dāng)日起加口服10 mg全反式維甲酸1 次/8h，連續(xù)治療14 d。兩組患者治療期間根據(jù)患者肝功能變化、外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)+網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。

1.3療效標(biāo)準(zhǔn) 完全緩解（CR）：患者臨床體征消失，外周血常規(guī)恢復(fù)正常，骨髓形態(tài)原始細(xì)胞比例25%，骨髓形態(tài)原始細(xì)胞比例下降不明顯或者超過(guò)治療前水平。

1.4觀察指標(biāo) 觀察兩組患者臨床治療效果、平均緩解時(shí)間以及藥物不良反應(yīng)發(fā)生率。

1.5統(tǒng)計(jì)分析 采集數(shù)據(jù)采用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，采用n，%表示；計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，采用（x±s）表示，P

2結(jié)果

試驗(yàn)組治療后9例CR，1例PR，治療總有效率為100.0%，顯著高于對(duì)照組的5例CR，2例PR，2例NR，1例死亡，總有效率為70.0%（P

3討論

NPM1基因突變?cè)缭?008年造血和淋巴組織腫瘤的分類(lèi)中將其納入AML伴重現(xiàn)性遺傳學(xué)異常中，用于臨床分類(lèi)。NPM1突變主要在正常核型中，另有11%～15%NPM1突變發(fā)生在除核型正常以外的患者，同時(shí)合并各種細(xì)胞遺傳學(xué)異常改變，但其在遺傳核型的發(fā)生及意義尚不十分清楚；因此，臨床上的研究更多的集中在正常核型NPM1突變的AML中。2011年美國(guó)NCCN指南根據(jù)細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)表現(xiàn)將AML分為低危、中危、高危3個(gè)亞群，其中NPM1陽(yáng)性伴正常核型的AML列為低危組，我們國(guó)內(nèi)在AML細(xì)胞遺傳學(xué)及分子生物學(xué)研究中相對(duì)滯后，近年來(lái)一直沿用NCCN指南標(biāo)準(zhǔn)對(duì)AML進(jìn)行分層診療；臨床上按患者年齡及體能狀況進(jìn)行分組治療，對(duì)于NPM1陽(yáng)性正常核型的急性髓系白血病患者更多的以多療程阿糖胞苷為基礎(chǔ)的化療為主，該方法雖然能改善患者癥狀，提高臨床療效，但是化療骨髓抑制時(shí)間長(zhǎng)，并發(fā)癥多，病人耐受性差，死亡率較高，患者治療依從性較差。

近年來(lái)，全反式維甲酸聯(lián)合化療在NPM1陽(yáng)性的急性髓系白血病患者中得到應(yīng)用，且效果理想。本研究中，試驗(yàn)組治療后治療總有效率為100.0%，顯著高于對(duì)照組的70.0%（P

綜上所述，NPM1陽(yáng)性的急性髓系白血病患者在化療基礎(chǔ)上聯(lián)合全反式維甲酸治療效果理想，臨床運(yùn)用有明顯優(yōu)勢(shì)，值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

臨床分子遺傳學(xué)范文第3篇

1965年生于重慶合川縣，教授、研究員、博士生導(dǎo)師?，F(xiàn)任中國(guó)科協(xié)委員，西部地區(qū)精神疾病分子遺傳學(xué)科學(xué)術(shù)帶頭人，四川大學(xué)華西醫(yī)院精神醫(yī)學(xué)研究室主任。

她多年來(lái)致力于精神疾病的遺傳病因?qū)W研究，先后主持了國(guó)家科技部，國(guó)家自然科學(xué)基金等國(guó)家級(jí)課題和高難度國(guó)際協(xié)作課題10余項(xiàng)；在國(guó)際國(guó)內(nèi)專(zhuān)業(yè)學(xué)術(shù)期刊上發(fā)表精神疾病分子遺傳學(xué)研究論文70余篇，其中SCI收錄40余篇。她于1997年獲全國(guó)“吳階平醫(yī)學(xué)研究獎(jiǎng)”，2001年獲第七屆“中國(guó)青年科技獎(jiǎng)”，2005年獲第二屆“中國(guó)青年女科學(xué)家獎(jiǎng)”。

精神疾病，這個(gè)名詞聽(tīng)起來(lái)就讓人“敬而遠(yuǎn)之”，但是當(dāng)年剛剛大學(xué)畢業(yè)，正值花樣年華的李濤卻選擇了到精神科工作，而且一干就是18年。

18年來(lái)與精神病患者打交道，李濤就是為了幫助精神病患者，治療他們，希望真正找到致病原因，進(jìn)而“徹底解放他們”。“如果你見(jiàn)到一些精神病患者和他們的家庭，就一定會(huì)同情他們，幫助他們。其實(shí)這也是在為社會(huì)分憂，因?yàn)橹囟刃跃穹至寻Y患者往往會(huì)對(duì)社會(huì)造成較大危害。”李濤說(shuō)。

18年過(guò)去了，今天李濤依然像當(dāng)初一樣熱愛(ài)自己的事業(yè)，一路前行，無(wú)怨無(wú)悔。

關(guān)愛(ài)――選擇奉獻(xiàn)的理由

1965年3月，一個(gè)春暖花開(kāi)的日子里，李濤出生在合川縣城一個(gè)干部家庭。從小學(xué)到高中，她都十分熱愛(ài)學(xué)習(xí)，成績(jī)一直名列班上前茅。

1981年，李濤參加高考。雖然考試發(fā)揮失常，但還算是高分，被四川醫(yī)學(xué)院(現(xiàn)四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)院)錄取，學(xué)習(xí)臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)。周?chē)挠H朋都很羨慕她，紛紛夸她前程遠(yuǎn)大。但1987年當(dāng)李濤大學(xué)畢業(yè)時(shí)，她卻留校主動(dòng)選擇了精神科，這讓親朋好友們都有些迷惑了，為什么要干這個(gè)有“風(fēng)險(xiǎn)”的行當(dāng)呢?他們關(guān)心地告訴她：“將來(lái)你如果搞臨床，整天同精神病患者打交道，你就不擔(dān)心患者犯病時(shí)傷害你?到時(shí)你后悔就晚了!”

面對(duì)大家的善意提醒，李濤沒(méi)有猶豫，她依然義無(wú)反顧地堅(jiān)持自己的選擇。

也許是命運(yùn)想考驗(yàn)李濤的意志，1987年李濤收治了一位40多歲患抑郁癥的女患者，卻出現(xiàn)了一個(gè)不幸的結(jié)果。女患者有一個(gè)幸福的家，她在接受醫(yī)治一個(gè)多月后，病情有所好轉(zhuǎn)，就被家人接回去了。但沒(méi)過(guò)多久，這位患者舊病復(fù)發(fā)導(dǎo)致自殺。消息傳來(lái)，李濤深受刺激，好多天她都感到心痛。

那些天，她寢食不安，她尋找，她思考，她希望通過(guò)自己的努力能夠找到精神病的病理學(xué)原因，以便把這個(gè)人群從精神的桎梏中解救出來(lái)。

從那以后，李濤就一直全心致力于精神病發(fā)病原因的研究。在精神科病房擔(dān)任住院醫(yī)師時(shí)，她曾有半年的時(shí)間完全與患者在一起，每天24小時(shí)都在醫(yī)院，一周只回家一次。除了臨床診治病人，她還潛心研究課題，積累學(xué)識(shí)。她向往有一天，能拿出真正有效的預(yù)防和治療措施，為患者減少痛苦。

18年來(lái)，李濤接觸了上千例精神病人?！拔曳浅Ｏ矚g這個(gè)專(zhuān)業(yè)。只要是喜歡的事，就不會(huì)覺(jué)得辛苦!”她對(duì)自己當(dāng)初的選擇無(wú)怨無(wú)悔。但她也曾有害怕的時(shí)候：有醫(yī)院的醫(yī)生被精神病患者打傷，她也曾為此落淚?！安粮裳蹨I后，想的是，一定要想辦法治好那個(gè)病患!”李濤說(shuō)。

尋找――花開(kāi)沃土別樣紅

科學(xué)研究表明，精神病具有遺傳性，與基因病變有關(guān)。為了說(shuō)明這個(gè)問(wèn)題，李濤打了個(gè)比方：“父母遺傳的基因中，如果存在幾個(gè)可能導(dǎo)致精神病的基因，就好比在人體中埋藏了幾顆‘定時(shí)炸彈’，外界的刺激不過(guò)是‘導(dǎo)火索’而已，即使沒(méi)有‘導(dǎo)火索’，在一定的時(shí)間，‘定時(shí)炸彈’也可能會(huì)爆炸的?！?/p>

為加快尋找致病基因的進(jìn)程，1989年，李濤又考取了本校研究生(碩博連讀)，成為華西醫(yī)大博士生導(dǎo)師劉協(xié)和的弟子，開(kāi)始了潛心找尋那些“定時(shí)炸彈”的旅程。

李濤迅速嶄露頭角。博士即將畢業(yè)時(shí)，正值導(dǎo)師劉協(xié)和又應(yīng)邀到倫敦參加學(xué)術(shù)研討會(huì)，他把李濤的博士論文的研究?jī)?nèi)容向英國(guó)精神病學(xué)研究室主任大衛(wèi)?科里爾作了介紹后，這位英國(guó)專(zhuān)家當(dāng)即就說(shuō)：“這很好，她既懂精神病學(xué)，又能搞分子遺傳學(xué)，我愿意與你們建立合作關(guān)系，共同研究?！?/p>

在劉協(xié)和教授的努力下，李濤得到英國(guó)方面提供的研究經(jīng)費(fèi)，赴英國(guó)進(jìn)行一年的合作研究。其間，她爭(zhēng)分奪秒，刻苦鉆研，一心撲在研究上，使課題進(jìn)展非常順利，合作成果顯著。合作結(jié)束后，她再次被對(duì)方邀請(qǐng)留在英國(guó)，做博士后研究，后被聘為高級(jí)講師。

功夫不負(fù)有心人。1996年，李濤率領(lǐng)精神醫(yī)學(xué)研究小組在全球范圍內(nèi)率先發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的與精神分裂有關(guān)的基因――兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)移酶。其實(shí)，在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的與精神病變有關(guān)的基因中，李濤就與其中的4個(gè)基因發(fā)現(xiàn)有關(guān)。李濤的這些研究結(jié)果，為進(jìn)一步定位與精神分裂癥及其相關(guān)性狀有關(guān)的易感基因提供了重要的依據(jù)。

也就是說(shuō)，李濤為全世界科學(xué)家繼續(xù)尋找人體中的那幾顆“定時(shí)炸彈”，提供了十分有用的坐標(biāo)與路線圖。它意味著人類(lèi)在通往征服精神疾病的道路上，又邁進(jìn)了一步。

執(zhí)著――沒(méi)有停歇的“候鳥(niǎo)”

2002年，李濤被聘為博士生導(dǎo)師。從此她正式帶博士生從事專(zhuān)題研究。先后有6位博士生在她門(mén)下開(kāi)展研究，進(jìn)展迅速，成為該專(zhuān)業(yè)的中堅(jiān)力量。

2005年8月初，李濤又去歐洲最大的精神病學(xué)研究機(jī)構(gòu)――英國(guó)倫敦大學(xué)國(guó)王學(xué)院精神病學(xué)研究所工作了。每年她都會(huì)在成都和倫敦之間飛來(lái)飛去，兩邊的工作都離不開(kāi)她。2005年11月8日，李濤被通知參加“中國(guó)青年女科學(xué)家獎(jiǎng)”頒獎(jiǎng)典禮，才匆匆結(jié)束了倫敦的工作趕了回來(lái)。因?yàn)樵诰癫⊙芯款I(lǐng)域取得不菲成績(jī)，李濤獲得了全球唯一獎(jiǎng)勵(lì)科學(xué)女性的項(xiàng)目――“中國(guó)青年女科學(xué)家獎(jiǎng)”和“西部特別貢獻(xiàn)獎(jiǎng)”，她也是首位獲得該大獎(jiǎng)的四川科學(xué)家。 “得到這個(gè)大獎(jiǎng)，我很意外，很多人都做得比我好?！崩顫f(shuō)，“它促使我要更加努力工作。”11月9日回到成都后，她把證書(shū)丟在家里，又忙開(kāi)了工作。

提及李濤，導(dǎo)師劉協(xié)和疼愛(ài)有加，他說(shuō)：“李濤對(duì)學(xué)術(shù)、對(duì)同仁充滿了愛(ài)心。她利用在英國(guó)從事研究的良好條件，幫助導(dǎo)師和她自己的學(xué)生出國(guó)交流、深造。她從不計(jì)較名利，卻特別看重學(xué)生與同仁的作為與發(fā)展。”李濤的學(xué)生馬小紅告訴記者，李老師養(yǎng)成了“談業(yè)務(wù)”的習(xí)慣，大家即使一起上街購(gòu)物，閑談的都是實(shí)驗(yàn)室里每位同事的業(yè)務(wù)發(fā)展情況，“她總是想著如何在專(zhuān)業(yè)上幫助別人揚(yáng)長(zhǎng)避短，取得新成就”。

作為一名四川大學(xué)對(duì)口支援專(zhuān)家，李濤還十分關(guān)心西部不發(fā)達(dá)地區(qū)的醫(yī)藥衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展。她不顧高原反應(yīng)，赴藏實(shí)地考察，對(duì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院的相關(guān)研究人員進(jìn)行專(zhuān)業(yè)知識(shí)培訓(xùn)，并幫助設(shè)計(jì)了自治區(qū)特色疾病高質(zhì)量遺傳資源庫(kù)的建設(shè)路線、管理規(guī)劃、工作計(jì)劃。

2004年，李濤開(kāi)始擔(dān)任四川大學(xué)華西醫(yī)院精神醫(yī)學(xué)研究室主任。她積極促進(jìn)華西醫(yī)院與國(guó)外一流研究機(jī)構(gòu)交流，開(kāi)展多種形式的國(guó)際合作，并定期選派西部年輕精神醫(yī)學(xué)、遺傳學(xué)工作者到國(guó)外學(xué)習(xí)。

臨床分子遺傳學(xué)范文第4篇

原發(fā)性免疫缺陷病(primary immunodeficiency diseases，PID)是由免疫系統(tǒng)成分遺傳性缺陷所致的一組綜合征，可導(dǎo)致抗感染能力、免疫穩(wěn)定功能、免疫監(jiān)視能力降低，引起各種病癥。從1952年Bruton首先證實(shí)報(bào)道先天性無(wú)丙球蛋白血癥為免疫缺陷病以來(lái)，對(duì)PID的研究已經(jīng)歷近60年的歷程。尤其是近30年來(lái)分子遺傳學(xué)和免疫學(xué)的進(jìn)步，導(dǎo)致越來(lái)越多人類(lèi)PID被發(fā)現(xiàn)和鑒定，迄今為止已發(fā)現(xiàn)160多種PID[1]，加深了人們對(duì)PID的認(rèn)識(shí)，它已成為世界性公眾開(kāi)始關(guān)注的一個(gè)重要的公共健康問(wèn)題，已被越來(lái)越多的國(guó)家所重視。本文就PID的發(fā)現(xiàn)和研究歷史、PID分類(lèi)進(jìn)展及各類(lèi)PID發(fā)生比率等方面予以重點(diǎn)介紹。

1PID的發(fā)現(xiàn)和研究歷史

20世紀(jì)50年代之前，致死性感染比較常見(jiàn)，人們對(duì)免疫缺陷病知之甚少。第二次世界大戰(zhàn)后抗生素廣泛使用，認(rèn)識(shí)到淋巴細(xì)胞在宿主防御中起著關(guān)鍵作用，并能應(yīng)用蛋白電泳技術(shù)檢測(cè)血清中的抗體蛋白，從而能對(duì)感染遺傳性敏感的患者進(jìn)行鑒定。1952年美國(guó)兒科醫(yī)師Bruton報(bào)道了一例8歲男孩患無(wú)丙球蛋白血癥(agammaglobulinemia)[2]，他通過(guò)遺傳學(xué)(發(fā)生于男孩，有家族史、為X-性聯(lián)隱性遺傳)、臨床病程(早期發(fā)病、反復(fù)化膿性感染、抗生素不能根治)和免疫學(xué)(血清電泳無(wú)丙球蛋白，用肺炎球菌、白喉、傷寒疫苗免疫不產(chǎn)生抗體，輸入人丙球蛋白能有效防治細(xì)菌感染)研究證實(shí)它是一種遺傳性免疫缺陷病，確立了免疫缺陷病的概念，開(kāi)啟了人們對(duì)免疫缺陷病的認(rèn)識(shí)。

實(shí)際上在Bruton之前，已臨床發(fā)現(xiàn)免疫缺陷病[3]。1922年Schultz報(bào)告了中性粒細(xì)胞減少癥，1926年Syllaba和Henner報(bào)告了毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)(ataxia telangiectasia，AT)，1929年Thorpe和Handley發(fā)現(xiàn)了粘膜皮膚白色念珠菌病，1937年Wiskott年發(fā)現(xiàn)了Wiskott-Aldrlch綜合癥，1950年Glanzmann和Riniker發(fā)現(xiàn)了無(wú)淋巴細(xì)胞的重癥聯(lián)合免疫缺陷病(severe combined immunodeficiency disease，SCID)。甚至在這些報(bào)告之前1919年Moore就在一豚鼠系中發(fā)現(xiàn)了未明確的常染色體隱性遺傳的補(bǔ)體缺陷。上世紀(jì)50年代主要通過(guò)家族遺傳史分析、臨床病程(尤其是反復(fù)感染、病情重、抗生素難以治愈、病期長(zhǎng)等)、白細(xì)胞總數(shù)和分類(lèi)計(jì)數(shù)、血清蛋白電泳、疫苗接種后抗體產(chǎn)生水平等對(duì)免疫缺陷病進(jìn)行分析和診斷，并認(rèn)識(shí)到PID有異質(zhì)性。

20世紀(jì)60年代胸腺的作用和抗體產(chǎn)生細(xì)胞組織來(lái)源的闡明，確立了現(xiàn)代細(xì)胞免疫和體液免疫的概念[4]。人類(lèi)免疫球蛋白類(lèi)和亞類(lèi)的確定，利用制備的抗血清用免疫電泳和單相免疫擴(kuò)散技術(shù)進(jìn)行定量分析，導(dǎo)致了IgA缺陷病的發(fā)現(xiàn)[5]，但是不能區(qū)分T細(xì)胞和B細(xì)胞。到20世紀(jì)70年現(xiàn)了區(qū)分T細(xì)胞和B細(xì)胞的方法。1970年P(guān)ernis等首先發(fā)現(xiàn)家兔B細(xì)胞表面具有Ig[5]之后不久，一些工作者報(bào)告觀測(cè)到綿羊紅細(xì)胞能與人淋巴細(xì)胞的一個(gè)亞群結(jié)合形成“玫瑰花環(huán)”，1974年Schiff等證實(shí)這個(gè)亞群細(xì)胞就是T細(xì)胞和NK細(xì)胞[5]。從而可利用這些方法計(jì)數(shù)T細(xì)胞和B細(xì)胞。1975年單克隆抗體技術(shù)[5]及70年代后期流式細(xì)胞術(shù)的出現(xiàn)極大改善了計(jì)數(shù)不同免疫細(xì)胞的技術(shù)能力。

20世紀(jì)80年代由于分子遺傳學(xué)和分子免疫學(xué)的發(fā)展，開(kāi)啟了對(duì)免疫缺陷基因的染色體定位分析、克隆鑒定和測(cè)序，建立了按基因克隆基因產(chǎn)物氨基酸序列分析免疫缺陷分子機(jī)制研究的技術(shù)線路，加速了免疫缺陷基因的發(fā)現(xiàn)和鑒定，促進(jìn)了免疫缺陷機(jī)制的研究。1986年根據(jù)染色體基因定位分析克隆出了第一個(gè)免疫缺陷基因——X-性聯(lián)慢性肉芽腫病的phox91基因[6]。隨后四年(1987-1990)年，數(shù)個(gè)實(shí)驗(yàn)室很快證實(shí)了phox91基因編碼產(chǎn)物的氨基酸序列結(jié)構(gòu)，并闡明了其免疫學(xué)缺陷的分子機(jī)制[7]。通過(guò)自發(fā)性免疫缺陷動(dòng)物模型和人工建立的免疫缺陷小鼠(插入免疫成分的突變基因產(chǎn)生的基因敲除小鼠)，也成為研究PID的重要技術(shù)，可以從基因水平、分子水平、細(xì)胞水平、整體水平探討免疫缺陷機(jī)制和深入闡釋免疫系統(tǒng)功能[8]。免疫學(xué)是一門(mén)實(shí)驗(yàn)科學(xué)，現(xiàn)代分子生物技術(shù)和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步，極大的促進(jìn)了免疫學(xué)向縱深發(fā)展，推動(dòng)了PID的深入研究，也為快速發(fā)現(xiàn)新的PID、科學(xué)分類(lèi)、鑒別和治療奠定了基礎(chǔ)。

2PID的分類(lèi)

2.1國(guó)際PID分類(lèi)會(huì)議

PID是一類(lèi)相對(duì)少見(jiàn)的疾病，20世紀(jì)60年代末，將這類(lèi)疾病分為體液和細(xì)胞免疫缺陷兩個(gè)部分。世界衛(wèi)生組織(WHO)為了對(duì)PID統(tǒng)一命名和分類(lèi)，指導(dǎo)和提高PID的臨床診斷、鑒別和治療水平，于1970年首次組織了一個(gè)專(zhuān)家委員會(huì)，開(kāi)始對(duì)PID進(jìn)行統(tǒng)一命名和分類(lèi)，到2009年共召開(kāi)了16次會(huì)議[9-11](見(jiàn)表1)。1977年召開(kāi)的第三次PID專(zhuān)家委員會(huì)，WHO倡議PID專(zhuān)家委員會(huì)每2~3年組織召開(kāi)一次會(huì)議，對(duì)PID分類(lèi)和命名進(jìn)行重新修訂，會(huì)后發(fā)表分類(lèi)報(bào)告。1996年第10次英國(guó)布里斯托爾會(huì)議決定，以后的會(huì)議組織委員會(huì)由國(guó)際免疫聯(lián)合會(huì)(IUIS)和Jeffrey Modell Foundtion(JMF)共同擔(dān)任。最近一次會(huì)議于2009-06月在愛(ài)爾蘭都柏林召開(kāi)，參加人員除專(zhuān)家委員會(huì)成員外，有來(lái)自世界六大洲參加者200多人，發(fā)言人數(shù)30多名。這些會(huì)議作為媒介，科學(xué)展示了PID及相關(guān)課題的研究進(jìn)展，有力推進(jìn)了PID的臨床和基礎(chǔ)研究，逐漸加深了人們對(duì)PID的認(rèn)識(shí)和關(guān)注。表1國(guó)際PID分類(lèi)會(huì)議表2八類(lèi)PID JMF中心調(diào)查的發(fā)生比率

2.2PID分類(lèi)進(jìn)展

1970年第一次PID分類(lèi)國(guó)際會(huì)議對(duì)10種已知的PID進(jìn)行了統(tǒng)一命名。2000年之前主要根據(jù)免疫系統(tǒng)受損的主要成分對(duì)PID進(jìn)行分類(lèi)，1999年IUIS對(duì)PID的分類(lèi)主要分為5大類(lèi)[12]：聯(lián)合免疫缺陷、主要抗體缺陷、其他確定的綜合征、先天性吞噬細(xì)胞缺陷、補(bǔ)體缺陷。21世紀(jì)開(kāi)始PID的劃分除了按免疫系統(tǒng)受影響的主要成分外，還要根據(jù)免疫缺陷的致病性進(jìn)行劃分。2004年發(fā)表的報(bào)告增加了3大類(lèi)缺陷病：免疫失調(diào)性疾病、固有免疫性疾病、自身炎癥性疾病，以后大的分類(lèi)沿續(xù)了2004年的分類(lèi)模式[9-11]。20世紀(jì)70~80年代分子遺傳學(xué)和免疫學(xué)的飛速發(fā)展，有力地促進(jìn)了對(duì)PID的研究。自1986年第一個(gè)免疫缺陷基因——X-性聯(lián)慢性肉芽腫病的phox91基因被鑒定后[6]，PID發(fā)病的分子基礎(chǔ)被逐漸闡明。1999年約有50個(gè)PID基因被發(fā)現(xiàn)[12]，到2009年被確定的免疫缺陷基因已上升到約160個(gè)[9]，每年約有10個(gè)免疫缺陷基因被發(fā)現(xiàn)，估計(jì)到2020年將有300多種PID被發(fā)現(xiàn)[13]。

2009年新的分類(lèi)表中在原項(xiàng)目如病名、基因缺陷/推測(cè)的致病性、遺傳方式、相關(guān)特征等基礎(chǔ)上新增設(shè)一列，以說(shuō)明各種PID疾病發(fā)生的相對(duì)頻率[9]。應(yīng)該指出，這些頻率的估計(jì)是基于已有的文獻(xiàn)報(bào)道，除了少數(shù)例外，沒(méi)有可靠的流行病學(xué)資料可以可靠地定義PID的發(fā)病率。此外，PID的頻率在不同的國(guó)家可能會(huì)有所不同，某些人群(特別是一些地方種族隔離的群體)由于基礎(chǔ)影響和遺傳漂變，對(duì)特定PID基因突變頻率會(huì)更高。例如，DNA的交聯(lián)修復(fù)蛋白1C(DCLRE1C)(Artemis)和Z-70相關(guān)蛋白(ZAP70)缺陷，在阿薩巴斯卡語(yǔ)印第安人和門(mén)諾教會(huì)成員中比其他人群更常見(jiàn)。同樣，MHC-Ⅱ類(lèi)缺陷，更容易出現(xiàn)在非洲北部。常染色體隱性免疫缺陷在高血緣率種群中發(fā)生頻率較高[9]。表3JMF中心對(duì)原發(fā)性免疫缺陷病發(fā)生比率調(diào)查雖然PID的分類(lèi)是為了協(xié)助鑒別、診斷和治療病人，但不應(yīng)教條應(yīng)用。特別是各PID盡管報(bào)告有典型的臨床及免疫表型，但是已認(rèn)識(shí)到這些疾病表型的病譜比原來(lái)認(rèn)識(shí)的要復(fù)雜。這種變化既反映了PID致病基因、其他基因、表觀遺傳(epigenetic)不同突變的影響，也反映了環(huán)境因素對(duì)表型的影響。此外，感染也可顯著改變臨床及免疫表型，即使患者最初就有PID的典型表現(xiàn)。因此，修正的分類(lèi)表中列出的與單基因缺陷相關(guān)的表型，絕不要認(rèn)為是絕對(duì)的[9]。

3各類(lèi)PID發(fā)生比率

各類(lèi)PID的發(fā)生比率在不同國(guó)家和地區(qū)的調(diào)查結(jié)果有較大差距，但是主要抗體缺陷在PID發(fā)生中所占的比率高于50%[14-15](見(jiàn)表2)，有些國(guó)家甚至更高，如西班牙和英國(guó)為72%，瑞典甚至高達(dá)87%[16]。JMF匯集全球50個(gè)國(guó)家和地區(qū)35 695例PID統(tǒng)計(jì)資料，列出了8類(lèi)43種免疫缺陷病，顯示主要抗體缺陷中普通可變型免疫缺陷(CVID)、IgA選擇性缺陷、IgG亞類(lèi)缺陷又最為常見(jiàn)，分別占了主要抗體缺陷的28%、23%、17%，三者合計(jì)約68%[14](見(jiàn)表3)，這三類(lèi)疾病通常癥狀相對(duì)較輕、發(fā)病較晚。應(yīng)該指出表2和表3中的細(xì)胞免疫缺陷實(shí)際上是IUIS PID分類(lèi)中的其他確定的綜合征，這類(lèi)疾病和聯(lián)合免疫缺陷的發(fā)生比率合計(jì)約占25%。其次是吞噬細(xì)胞缺陷、其他免疫缺陷，補(bǔ)體缺陷、免疫失調(diào)性缺陷、固有免疫缺陷發(fā)生比率更小。在160多種PID中，常染色體隱性遺傳(AR)病約占75.0%，常染色體顯性遺傳(AD)病約占16.5%，X-性聯(lián)隱性遺傳(XL)病占8.5%[9]。X-性聯(lián)隱性遺傳病雖然病種較少，但是他在PID中的發(fā)生比率較高，約占20%以上，而且?guī)缀醵际侵匕YPID[14](見(jiàn)表3)，因此嬰幼兒中男性發(fā)生PID的比例較高。JMF收集的樣本量大，因此其統(tǒng)計(jì)的各類(lèi)PID的發(fā)生比率比以前各統(tǒng)計(jì)資料報(bào)告更有代表性。但是應(yīng)該指出，不同地區(qū)和人群會(huì)有所差異，隨著PID研究的深入和調(diào)查范圍的擴(kuò)大，各類(lèi)PID的發(fā)生比率也會(huì)不斷有些變化。

參考文獻(xiàn)

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14Jeffrey Modell Foundtion(JMF)\[J\].Survey Results Published in 2009.

臨床分子遺傳學(xué)范文第5篇

【關(guān)鍵詞】 角膜營(yíng)養(yǎng)不良，遺傳性;，基因;，突變;，序列分析，DNA;，聚合酶鏈反應(yīng);，系譜

摘要:目的 以基因突變分析一角膜營(yíng)養(yǎng)不良家系的致病分子基礎(chǔ)。方法 應(yīng)用PCR產(chǎn)物直接DNA測(cè)序及限制性?xún)?nèi)切酶分析檢測(cè)家系中7例患者和6例表型正常成員的K3、K12和BIGH3基因突變情況。結(jié)果 該家系患者成員在K3與K12基因的編碼序列區(qū)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)突變，而B(niǎo)IGH3基因外顯子12存在CGG>TGG(R555W)突變雜合子，家系表現(xiàn)正常成員及正常對(duì)照均無(wú)BIGH3基因突變;限制性?xún)?nèi)切酶分析結(jié)果顯示突變與疾病表現(xiàn)型呈完全共分離。結(jié)論　利用基因突變分析確診我國(guó)首例報(bào)道的Meesmann角膜營(yíng)養(yǎng)不良家系屬于顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良，且為BIGH3 R555W雜合突變類(lèi)型。

關(guān)鍵詞: 角膜營(yíng)養(yǎng)不良，遺傳性; 基因; 突變; 序列分析，DNA; 聚合酶鏈反應(yīng); 系譜

ABSTRACT: Objective Molecular genetic analysis of a large Chinese corneal dystrophy kindred. Methods Thirteen inpiduals including seven affected and six unaffected family members in this granular corneal dystrophy kindred were studied. Genomic DNA was purified from blood peripheral leukocytes. All of the exons of both the Keratin3 and the keratin12 genes， and the exon 4 and exon 12 of BIGH3 gene were amplified using polymerase chain reaction(PCR)， followed by direct bidirectional sequencing for mutation detection.

The mutation was confirmed by restriction digest analysis. Results Direct sequencing of the patients' genomic DNA revealed there was no mutation in all of the exons of K3 and K12 genes， but a missense mutation(CGG>TGG) in the exon12 of BIGH3(R555W) was found. This mutation in this family completely cosegregates with the disease phenotype. Conclusion This kindred was diagnosed with granular corneal dystrophy harbored a heterozygous R555W mutation of the BIGH3 gene.

KEY WORDS:corneal dystrophy，hereditary; genes; mutation; polymerase chain reaction

基金項(xiàng)目: 福建省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(C0510009)，福建醫(yī)科大學(xué)科學(xué)研究發(fā)展基金資助項(xiàng)目(FJGXY04020)

角膜營(yíng)養(yǎng)不良(corneal dystrophy)是一組與遺傳有關(guān)的原發(fā)性、具有病理學(xué)組織學(xué)特征的疾病。目前，已確定與角膜營(yíng)養(yǎng)不良的致病基因有BIGH3、CHST6、K3、K12、M1S2和GSN等。BIGH3基因突變至少可導(dǎo)致4種類(lèi)型的角膜營(yíng)養(yǎng)不良，包括顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良(R555W)、Avellino角膜營(yíng)養(yǎng)不良(R124H)、格子狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良(R124C)和ThielBehnke角膜營(yíng)養(yǎng)不良(R555Q)[1]。K3和K12基因突變導(dǎo)致Meesmann角膜營(yíng)養(yǎng)不良[2]。筆者研究的家系為福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科普查時(shí)發(fā)現(xiàn)，先證者在裂隙燈下檢測(cè)可見(jiàn)雙角膜中央?yún)^(qū)有散在的細(xì)小圓形小泡，位于上皮層，斜照時(shí)呈散在的灰白點(diǎn)狀，后照亮下呈透明小氣泡樣，臨床表現(xiàn)為Meesmann角膜營(yíng)養(yǎng)不良[3]。2004年，筆者隨訪該家系，家系圖譜表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳;在裂隙燈下檢測(cè)先證者，發(fā)現(xiàn)不僅角膜上皮層受累，而且累及角膜實(shí)質(zhì)層，臨床表現(xiàn)為顆粒狀或Avellino角膜營(yíng)養(yǎng)不良。筆者對(duì)該家系進(jìn)行分子遺傳學(xué)分析，以確定其類(lèi)型與致病分子機(jī)制。

1 對(duì)象與方法

1.1　對(duì)象

家系3代38人，受累患者12人，獲得其中7例受累患者和6例非受累正常家系成員的血樣標(biāo)本，10例無(wú)眼疾正常人的血樣標(biāo)本作為正常對(duì)照組(圖1)。:獲取血樣標(biāo)本的家系成員.

1.2 試劑和儀器

PCR所用試劑、瓊脂糖凝膠、溴化乙錠(EB)、BstXⅠ和DNA分子量標(biāo)記等(大連寶生物公司);PCR擴(kuò)增BIGH3基因外顯子12的引物序列: BIGH3e12F:5’CAGCGTGGTGAGGTATTTAAGG3　BIGH3e12R:5’GTAGTAAAGGCTTCCCAGGGTT3’

1.3 基因組DNA提取

取外周血樣3 mL，置于EDTAK3抗凝的真空采血管中;按Wizard Genome DNA Purification Kit(Promega)說(shuō)明書(shū)提取基因組DNA。

1.4 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)

PCR反應(yīng)體系25 μL，包括10×PCR緩沖液(20 mmol/L Mg2＋plus)2.5 μL、dNTP mix(2.5 mmol/L each)1 μL、PCR上游和下游引物(10 μmol/L)各1 μL、基因組DNA(約100 ng)1 μL和TakaRa Ex TaqTM 0.25 μL、ddH2O補(bǔ)足25 μL;PCR反應(yīng)條件為:94 ℃ 3 min94 ℃ 30 s55 ℃ 30 s72 ℃ 30 s，30個(gè)循環(huán);72 ℃ 3 min。

1.5 PCR產(chǎn)物直接測(cè)序

2％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物特異性后，PCR產(chǎn)物直接送大連寶生物公司測(cè)序。

1.6 限制性?xún)?nèi)切酶分析

BIGH3 R555W位點(diǎn)突變產(chǎn)生一個(gè)新的限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)，可被BstXⅠ識(shí)別(BstXⅠ識(shí)別序列為:CCANNNNN/NTGG);酶切反應(yīng)體系20 μL，45 ℃ 3 h。

2 結(jié)果

2.1 K3和K12基因突變檢測(cè)

Meesmann角膜營(yíng)養(yǎng)不良是由K3和K12基因突變所致，且目前發(fā)現(xiàn)的突變?nèi)糠植荚贙3和K12角蛋白高度保守區(qū)HIM(helix initiation motifs)和HTM(helix termination motif)區(qū)域[2，4]。首先篩查文獻(xiàn)已報(bào)道的K3和K12基因突變區(qū)域，即K12基因的外顯子1和外顯子6以及K3基因的外顯子7。DNA測(cè)序結(jié)果表明在這些區(qū)域沒(méi)有突變，進(jìn)一步掃描K3和K12基因整個(gè)外顯子區(qū)域，也未發(fā)現(xiàn)突變。2004年隨訪，裂隙燈檢測(cè)發(fā)現(xiàn)癥狀發(fā)生改變，先證者的臨床表現(xiàn)可能為顆粒狀或Avellino角膜營(yíng)養(yǎng)不良(圖2)。

2.2BIGH3基因突變檢測(cè)

PCR擴(kuò)增BIGH3基因外顯子4和外顯子12，DNA直接測(cè)序分析，結(jié)果顯示患者(先證者Ⅱ7和Ⅲ1)在BIGH3基因的外顯子12發(fā)生雜合突變(CGG>TGG)，即BIGH3 R555W突變(圖3A);另外，在兩位患者的BIGH3基因外顯子12還發(fā)現(xiàn)一個(gè)多態(tài)位點(diǎn)(Phe540Phe)(圖3B);內(nèi)切酶BstXⅠ分析結(jié)果顯示該家系的BIGH3 R555W突變與疾病表現(xiàn)型呈完全共分離(圖3C)，表明該例Meesmann角膜營(yíng)養(yǎng)不良家系屬顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良，且為BIGH3基因R555W突變雜合子。

3 討論

角膜營(yíng)養(yǎng)不良一般依據(jù)病史和裂隙燈檢測(cè)可作出初步的臨床診斷，且主要按病變發(fā)生的解剖學(xué)部位將其分為前部、實(shí)質(zhì)部和后部角膜營(yíng)養(yǎng)不良三類(lèi)。然而，在進(jìn)行性病變過(guò)程中，角膜營(yíng)養(yǎng)不良還表現(xiàn)一個(gè)共同特點(diǎn)，即開(kāi)始先侵犯角膜的某一層，晚期可波及鄰近層次，甚至影響全層角膜。因此， A:DNA測(cè)序分析突變位點(diǎn); B:BIGH3單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(T/C); C:限制性?xún)?nèi)切酶BstXⅠ分析.

在臨床診斷分型，特別是晚期患者的診斷分型帶來(lái)很大的混淆。隨著角膜營(yíng)養(yǎng)不良分子遺傳學(xué)的深人研究，以致病基因的分子特征作為臨床診斷和分類(lèi)、分型的依據(jù)，其可靠性和準(zhǔn)確性也得到了大大提高，并且越來(lái)越受到國(guó)內(nèi)外同行們的廣泛認(rèn)可。

Meesmann角膜營(yíng)養(yǎng)不良屬于前部角膜營(yíng)養(yǎng)不良，臨床表現(xiàn)主要為角膜上皮層內(nèi)散在著無(wú)數(shù)細(xì)小圓形透明囊泡，是由K3或K12基因突變所致[2]。顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良屬實(shí)質(zhì)部角膜營(yíng)養(yǎng)不良，依據(jù)角膜表征目前至少可以分為3種類(lèi)型：Avellino角膜營(yíng)養(yǎng)不良、典型顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良和淺表變異型顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良，分別是由于BIGH3基因的R124H、R555W和R124L突變所致[5]。目前，在世界各國(guó)的相關(guān)研究中均發(fā)現(xiàn)BIGH3基因的第4外顯子的R124和第12外顯子的R555為突變熱點(diǎn);與BIGH3基因R555W突變相關(guān)的顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良患者在歐洲和美國(guó)較為常見(jiàn)，在日本卻較為少見(jiàn)[1]。

分子遺傳學(xué)分析結(jié)果顯示，筆者研究的家系受累患者存在BIGH3 R555W突變雜合子，突變與疾病表現(xiàn)型呈完全共分離，而在K3和K12基因沒(méi)有發(fā)現(xiàn)突變。因此，從基因突變分析結(jié)果可以確診該家系不屬于Meesmann角膜營(yíng)養(yǎng)不良，而是典型的顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良。

據(jù)報(bào)道在該家系中先證者角膜病變開(kāi)始發(fā)生于上皮層[3]，隨后波及角膜實(shí)質(zhì)部。因此，結(jié)合臨床癥狀與基因突變分析，該家系患者又可能是BIGH3 R555W雜合突變導(dǎo)致的角膜上皮層與基質(zhì)層先后受累的顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良，可歸于淺表變異型顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良。Escribano等研究表明角膜上皮細(xì)胞特異性高表達(dá)BIGH3基因[6];Hirano等認(rèn)為BIGH3蛋白是由上皮細(xì)胞合成，內(nèi)皮細(xì)胞也可能合成BIGH3蛋白[7];Okada曾報(bào)道一種由BIGH3 R555W純合子突變導(dǎo)致的淺表變異顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良[8]。這些報(bào)道間接說(shuō)明BIGH3 R555W雜合突變也又可能導(dǎo)致淺表變異型顆粒狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良。遺憾的是沒(méi)有先證者的早期裂隙燈照片及組織病理檢測(cè)來(lái)直接支持這種可能性。

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