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關鍵詞:增值型內(nèi)審;社會責任;企業(yè)價值
中圖分類號:F272 文獻標志碼:A 文章編號:1673-291X(2012)06-0031-02
一、社會責任與企業(yè)價值
企業(yè)社會責任研究源于20世紀20年代。1923年,英國學者歐力文·謝爾頓提出了“企業(yè)社會責任”(Corporate Social Responsibility,簡稱CSR)的概念,指出企業(yè)應該為其影響到其他實體、社會和環(huán)境的所有行為負有責任?,F(xiàn)實中,企業(yè)社會責任興起于20世紀50年代的西方發(fā)達國家,其核心思想在于企業(yè)在獲取利潤、履行股東受托責任的同時,還需承擔起對自己員工、周邊環(huán)境及其他利益相關方面的責任,如保護勞動者健康與其他合法權益、維護生產(chǎn)安全、節(jié)約能源資源、遵守商業(yè)道德以及履行其他社會責任等等。
誠然,企業(yè)承擔社會責任需要投入大量的人力、物力和財力,企業(yè)的短視行為導致的結果是很多企業(yè)都不愿主動承擔社會責任。然而,研究表明,企業(yè)主動承擔并積極披露社會責任,會影響其財務績效與企業(yè)價值,對它們產(chǎn)生積極作用。Rao與Hamilton(1996)、Frootman(1997)實證表明公司不承擔社會責任或不合法規(guī)的表現(xiàn)會影響公司的市場價值。普雷斯頓和奧班農(nóng)(Preston和O.Bannon)仔細分析了美國67家大公司1982—1992年的有關數(shù)據(jù),用財富企業(yè)社會名譽調(diào)查代表社會責任水平,用總資產(chǎn)利潤、凈資產(chǎn)利潤和投資利潤作為財務績效的代表,得出了“對美國大公司而言,企業(yè)社會表現(xiàn)和財務績效之間存在正相關關系”。Hillman和Keim(2001)認為通過承擔更多的社會責任,與主要利益相關者建立緊密關系。這種關系能幫助企業(yè)發(fā)展不可見的,有價值的資產(chǎn)。投資與利益相關者的關系,能夠?qū)е驴蛻襞c供應者的忠誠,降低員工的離職率以及提高企業(yè)聲譽。
就企業(yè)承擔社會責任的外部性而言,可從外部效應的兩個方面外部成本和外部收益進行分析。如果企業(yè)能將經(jīng)濟活動帶來的外部成本內(nèi)部化,則表現(xiàn)為企業(yè)自覺承擔了社會責任,該外部成本的貨幣計量即為企業(yè)承擔社會責任的成本支出。而企業(yè)承擔社會責任的外部收益則表現(xiàn)為企業(yè)形象的提升、社會知名度的提高等,從而為企業(yè)帶來直接或間接的社會收益,最終提升企業(yè)價值。這兩方面共同作用的結果為企業(yè)社會責任的承擔短期內(nèi)會表現(xiàn)為外部成本高于外部收益,但長期來看,外部收益很快大于外部成本,從而使企業(yè)整體價值的增量為正值。
二、增值型內(nèi)審與企業(yè)價值
1999年6月,由120多個國家參加的國際內(nèi)部審計師協(xié)會(IIA)理事會通過了新的內(nèi)部審計定義:“內(nèi)部審計是一種獨立、客觀的保證和咨詢活動,其目的是增加組織的價值和提高組織的運作效率。它通過系統(tǒng)化和規(guī)范化的方法,評價和改進風險管理、控制和治理過程的效果,幫助組織實現(xiàn)其目標”。在此,“為組織增加價值”第一次被列入內(nèi)部審計定義,自此,內(nèi)部審計進入了一個新的發(fā)展階段——價值增值階段。價值本來是從生產(chǎn)和銷售過程中創(chuàng)造出來的,內(nèi)部審計雖然不參加生產(chǎn)和銷售活動,但它可以通過保護組織資產(chǎn)、減少組織風險、降低自身審計成本、提出有價值的建議、增加組織獲利機會等活動來為組織增加價值,為組織帶來巨大的利益。其增值活動具體表現(xiàn)在內(nèi)部控制領域、風險管理領域和公司治理領域。
首先,在內(nèi)部控制中,內(nèi)部審計主要通過鑒證和咨詢功能為組織增加價值。根據(jù)修訂后的《內(nèi)部審計實務標準》第2120.AI-1條,內(nèi)部審計應該在風險評價結果的基礎上,評價覆蓋機構治理、運營及信息系統(tǒng)等內(nèi)容的控制程序的充分性與有效性。通過這種對內(nèi)部控制的再控制,審計師們對為組織提供增值服務和減少損失作貢獻。另外,增值型內(nèi)審還很重視顧客需求,會根據(jù)不同顧客需求提供多產(chǎn)品服務,通過增值服務使企業(yè)增值。其次,內(nèi)部審計通過對質(zhì)量風險管理、速度風險管理、投資成本控制風險管理等進行審計評價,提供鑒證和咨詢服務,為企業(yè)增加價值,具體內(nèi)容如:評價風險管理過程、評價關于關鍵風險的報告、檢查對關鍵風險的管理、指導對風險的應對措施、協(xié)調(diào)企業(yè)風險管理活動、強化對風險的報告、維持和開發(fā)適合企業(yè)的風險管理框架、制定有待董事會批準的風險管理戰(zhàn)略等等。最后,內(nèi)部審計作為現(xiàn)代公司治理的一部分,能評價和提高公司治理的有效性。增值型內(nèi)審不僅僅承擔著監(jiān)督者的職能,而且承擔部分控制者的治理職能,主動為組織價值增值服務,是組織價值鏈當中重要的一個環(huán)節(jié)。
三、企業(yè)社會責任的增值型內(nèi)審
增值型內(nèi)審向企業(yè)社會責任審計領域延伸,是增值性內(nèi)審自身謀求發(fā)展的需要,也是企業(yè)面對社會環(huán)境的現(xiàn)實選擇。增值型內(nèi)審促使企業(yè)社會責任的承擔及披露為其帶來更多價值增值。越來越多的企業(yè)意識到,只有履行好社會責任,才能從長遠視角保障企業(yè)生產(chǎn)經(jīng)營活動的正常進行,方可塑造良好的社會形象,維持可持續(xù)發(fā)展的生命力。社會責任已成為了企業(yè)進行價值增值必不可少的內(nèi)容。另外,增值型內(nèi)審以實現(xiàn)組織目標為自身的目標,以為組織增加價值為其目的。凡是能為組織增加價值的鑒證和咨詢活動,內(nèi)部審計都積極地開展。因而,企業(yè)進行社會責任的增值型內(nèi)部審計是在目前社會環(huán)境倡導文化建設,強調(diào)“軟控制”對企業(yè)的約束作用,在社會責任相關法律規(guī)范尚未非常完善現(xiàn)狀下,能更好促進社會責任履行,進而提升企業(yè)價值。目前,企業(yè)自身的內(nèi)部制度建設與組織結構的完備程度是企業(yè)能否很好履行社會責任的一個重要因素。而增值型內(nèi)審所提倡的柔性控制恰好能較為有效地彌補很多企業(yè)在這方面的不足。尤其在誠信缺失、內(nèi)部人控制現(xiàn)象較為普遍的情況下,社會責任的履行更需要增值型內(nèi)審的推動與協(xié)助。
就增值型內(nèi)審產(chǎn)生增值活動的主要領域:內(nèi)部控制領域、風險管理領域和公司治理領域而言,能夠較為全面地考慮到股東、員工、顧客、社區(qū)、政府以及社會整體的利益,考慮到企業(yè)責任對象的經(jīng)濟責任、法律責任、倫理責任、自發(fā)責任等責任形式。根據(jù)目前社會責任報告要求的主要內(nèi)容,社會責任內(nèi)審的內(nèi)容主要應包括收益貢獻責任、對環(huán)境的責任、對職工的責任、對消費者的責任和社會道義責任等。據(jù)調(diào)查,在企業(yè)社會責任履行方面的不作為中,公眾對企業(yè)損害員工權益和消費者權益的行為最為反感。因此,增值型內(nèi)審在進行操作和報告時,應特別注意結合企業(yè)特點,對公眾關注事項予以特別關心,這樣才能更好發(fā)揮提升企業(yè)價值的作用。增值型內(nèi)審在對企業(yè)社會責任相關事宜進行審計時,還應注意需采用多種審計方法,用現(xiàn)代化審計手段進行輔助,關注細節(jié),最終形成一套包括審計范圍和內(nèi)容、審計依據(jù)、審計方法、審計過程、發(fā)現(xiàn)的問題及對策建議等內(nèi)容的審計報告,以利于企業(yè)管理者決策。
四、企業(yè)社會責任增值型內(nèi)審應注意的兩個問題
1.正確認識社會責任增值型內(nèi)審的作用。雖然從必要性與可行性、相關內(nèi)容與特點等方面來看,增值型內(nèi)審能很好促進企業(yè)社會責任的履行,增強企業(yè)的自覺性與針對性,但增值型內(nèi)審并非解決企業(yè)社會責任問題的萬能藥。內(nèi)審部門作為企業(yè)內(nèi)部組成部分,不可避免在一定程度上受到內(nèi)部人影響與控制,獨立性較差,不能完全擺脫內(nèi)部人際關系等相關因素干擾,因而,內(nèi)審效果可能與實際情況脫節(jié)。信息使用者在評價企業(yè)承擔社會責任狀況、進行相關決策時,不能夠毫無懷疑的直接利用內(nèi)審結果,需對其信息的質(zhì)量進行分析,在該項審計基礎上,輔以其他必要手段,如采用內(nèi)部控制測試等,進一步核實并合理利用相關結論,還可結合社會責任外部調(diào)查與審計結果,使用一些外部專家、行業(yè)協(xié)會、或獨立審計機構得出的報告進行最終分析。
2.考慮社會責任增值型內(nèi)審的成本效益問題。增值型內(nèi)審對社會責任相關問題的解決固然效果良好,但也需注意有關成本。由于企業(yè)社會責任對象較多,內(nèi)容較泛,如對其面面俱到地進行審計,支出耗費太大,一旦超出該項業(yè)務帶來的收益,無論從企業(yè)自身來看還是從整個社會來看,都不符合成本效益原則。所以在進行社會責任增值型內(nèi)審時,一要控制好審計范圍與內(nèi)容,二要提高審計效率與水平。在選擇審計范圍與內(nèi)容時,不僅要考慮企業(yè)特征、社會關注的焦點,還要考慮企業(yè)總體目標與財務目標,不可能將所有問題的一切細節(jié)都關注到,需估算相關支出,盡量用更少的錢解決更多問題。同時,切實提高內(nèi)審效率,提高內(nèi)審人員素質(zhì),加強相關業(yè)務培訓,妥善處理好社會責任內(nèi)審與經(jīng)濟責任內(nèi)審的關系,處理好社會責任內(nèi)審與社會責任國家審計、社會審計的關系,處理好企業(yè)內(nèi)部各部門之間關系,真正提高內(nèi)審效益。
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關鍵詞: 高中數(shù)學教學 新增內(nèi)容 算法初步
高中數(shù)學新課程在全國已經(jīng)全面展開,根據(jù)現(xiàn)代數(shù)學的發(fā)展和吳文俊院士的建議,在這次高中數(shù)學新課程的改革中新增了“算法初步”。在教學中卻存在一些令老師們感到困惑的問題。我從對《普通高中數(shù)學課程標準》“算法初步”部分的理解與把握,對“算法初步”教學中應注意的問題等方面談談認識。
《普通高中課程標準》提出:“算法是數(shù)學及其應用的重要組成部分,是計算機科學的重要基礎。隨著現(xiàn)代信息技術飛速發(fā)展,算法在科學技術,社會發(fā)展中發(fā)揮著越來越大的作用,并日益融入社會生活的許多方面。算法已經(jīng)成為現(xiàn)代人應具備的一種數(shù)學素養(yǎng)。”新課標中將算法列為必修內(nèi)容,正是為了使學生形成符合時代要求的新的“數(shù)學基礎”。它既是高中數(shù)學的新增內(nèi)容,又具有較強的應用性。另外,教材編寫中把算法內(nèi)容作為主線滲透到其他數(shù)學內(nèi)容中,并與高中信息技術教材相呼應。
算法簡單地說是一類問題有效的解題方法,它是由基本運算及規(guī)定的運算順序所構成的完整的解題步驟。它強調(diào)的是通性通法,不關注問題的特殊性。機械地按照某種確定的步驟行事,通過一系列簡單計算操作,完成復雜計算的過程,被人們稱為“算法”過程?,F(xiàn)代意義上的“算法”通常是指可用計算機解決的某一類問題的程序或步驟,這些程序或步驟必須是明確和有效的,且能在有限步驟內(nèi)完成。描述算法可用不同的方式,可以用自然語言、基本語句描述,也可以使用程序框圖直觀地表示算法的整個結構。
算法教學是控制學生解題過程的一種教學方法。其代表人物為前蘇聯(lián)心理學家л.н.蘭達。他認為使學生掌握了思考活動的一般方法就可以發(fā)展學生的智力。在高中教學中引入算法正是對蘭達所提出的算法教學的最直接的應用。
算法教學過程遵循了人類邏輯推理過程――由特殊到一般的歸納過程,再由一般到特殊的演繹過程。學生在算法學習過程中要充分體會這種邏輯思維方法,這對于培養(yǎng)學生的邏輯思維能力和解決數(shù)學問題的程序化能力有極大的益處,使學生在解決數(shù)學問題時會有意識地尋求一種通法,在思維的鍛煉中提高條理性和嚴密性,使學生形成合理的思考方式。
算法教學中記憶性的學習比較少,更多的是給學生一個自由探索發(fā)展個性的平臺。學生在教師提出問題后有目的地探索解決問題的方法并對結果進行調(diào)試和檢驗。在這個過程中,學生理解知識、整合、內(nèi)化,并使得思維得到進一步發(fā)展。
算法教學采用逐步滲透、逐級強化提高的螺旋式結構。在必修1中的二分法是算法最早出現(xiàn)的問題,在必修2中的直線與圓的方程的性質(zhì)的研究中進一步滲透,在必修3第一章中正式學習,在第二章統(tǒng)計和第三章概率提出了算法思想的應用問題;在必修4的弧度制中進一步提出了其應用;對于文科的學生在選修系列1-2中又追加了程序框圖和流程圖,實際上算法已經(jīng)成為高中數(shù)學的一條主線。算法除了作為數(shù)學3的內(nèi)容之外,其思想還應滲透在整個高中數(shù)學課程中。比如在數(shù)學2的解析幾何初步中,對利用公式計算的幾何問題進行分步求解,其中就蘊涵程序化解題思想。因而在數(shù)學1、數(shù)學2中的教學中,應當注意逐步滲透算法思想,讓學生逐步體會程序化解題的方法,為數(shù)學3的算法教學做好鋪墊。在數(shù)學3的算法教學中,要鼓勵學生盡可能運用算法知識解決接觸過的相關問題,例如:設計算法求方程的近似解,讓程序化思想成為學生思考問題的習慣,在往后相關內(nèi)容(如制作隨機數(shù)表、數(shù)列的前n項和)教學中,也要注意體現(xiàn)數(shù)學與算法的有機結合,有意識地引導學生體會算法思想,使其體會到掌握算法思想對提高數(shù)學能力的重要性。
新課標中算法內(nèi)容的引入,是適應信息技術高速發(fā)展的需要。算法體現(xiàn)了通用化、機械化、程序化等特點,在算法教學中有以下幾點建議:
(1)同時走好算法表示的三條路,即自然語言、程序框圖、算法語句。在教學中,可以結合具體的算法實例,分析用自然語言表示算法的步驟,繪制相應算法的程序框圖,并編寫相應框圖的算法程序。注意三條途徑的目的是體會其中的算法思想。
(2)剖析清楚教材中的幾例典型算法實例,例如解一元二次方程、二元一次方程組,質(zhì)數(shù)的判定,按大小順序輸出三個數(shù),1~100的累加,二分法求方程近似解,分段函數(shù)的求值等。
2011年12月22日,光大銀行私人銀行中心(北京)正式揭牌成立,成為第12家涉足私人銀行業(yè)務的商業(yè)銀行。上海、杭州等地私人銀行中心也將相繼成立。
財富管理在中國尚不成熟,對于高凈值客戶群體市場來說,還是一片藍海,在外資銀行對私人銀行業(yè)務領域尚不能充分涉足的情況下,中資銀行搶先發(fā)展私人銀行業(yè)務,無疑占有先機,多家銀行都正在或正準備在這個市場發(fā)力。據(jù)《投資者報》記者了解,北京銀行也有意成立私人銀行,正在籌劃中。
作為金字塔塔尖的高端零售客戶市場,私人銀行在中國已走過4個年頭,但現(xiàn)在很多客戶對私人銀行的理解仍很模糊。
“私人銀行就是為我們提供私密服務的銀行?!币晃黄髽I(yè)主李先生這樣告訴記者,他考察過招行等幾家私人銀行,目前已是某銀行的私人銀行客戶,但他坦言對此還沒有完全理解。
“我感覺私人銀行就像證券公司的大戶室,提供平臺?!眹裥磐匈Y產(chǎn)管理部負責人劉習勇評價道,在很多信托公司及PE機構眼里,私人銀行最大的意義就是代銷產(chǎn)品。
之所以有這樣的看法,主要由于中國私人銀行業(yè)務起步晚,未來私人銀行業(yè)務將向全權委托資產(chǎn)管理轉變。
4年成立12家
私人銀行在中國出現(xiàn)不過是近4年的事情。
中國銀行在中資行中最早推出私人銀行業(yè)務,2007年3月中行私人銀行部成立。同年8月,招行和中信銀行也設立了私人銀行部門,同年9月交行私人銀行成立。
中信銀行與中央財經(jīng)大學聯(lián)合的《中國私人銀行客戶特征與未來發(fā)展趨勢研究報告》(下稱《報告》)顯示,截至2010年底,中資商業(yè)銀行中有8家開設了私人銀行業(yè)務,除了2007年成立的4家外,還有工行、建行、民生和農(nóng)行。
2011年又有4家銀行加入,除了剛成立的光大外,還有興業(yè)、浦發(fā)和華夏。
到目前為止,合計共有12家銀行成立私人銀行中心或部門。
銀行青睞私人銀行業(yè)務主要原因有二。首先是個人財富和高凈值人群迅猛增加。
《報告》顯示,過去五年,全國個人可投資資產(chǎn)總體規(guī)模從2006年36萬億元增長到2010年底87萬億元,增幅為140%,復合年均增長率為24.5%。截至2010年底,高凈值人群數(shù)量達100萬,四年來平均增速為29.1%。預計未來5年年均增速將達17%,到2015年能達到219萬人。
其次是中資行轉型的需要。近年來,金融脫媒現(xiàn)象日益加劇,商業(yè)銀行傳統(tǒng)業(yè)務收入渠道及利潤空間不斷被壓縮,財富管理平臺作為金融服務平臺的重要組成部分開始成為各中資行經(jīng)營及業(yè)務轉型的重要選擇。
其實,現(xiàn)在是中資行發(fā)展私人銀行業(yè)務的黃金時期。隨著高凈值人群的增多,已經(jīng)產(chǎn)生了對私人銀行服務的強烈需求,而在海外有著豐富經(jīng)驗的外資私人銀行由于政策的限制,在中國尚不能放開手腳,無法像中資行一樣提供較完整的產(chǎn)品線。
所以,中資行具備了占領市場、擴大客戶群的先發(fā)優(yōu)勢。
不同于貴賓理財
經(jīng)過4年的發(fā)展,客戶對私人銀行的認知度有一定提升。不過對于中資行來說,私人銀行仍然屬于新生事物,出現(xiàn)問題、瓶頸在所難免。
在很多客戶眼中,私人銀行就是貴賓理財?shù)纳壈妗!爸車芏嗯笥讯挤从乘饺算y行就是比原來的貴賓理財門檻高點,產(chǎn)品收益率也相對更穩(wěn)定,其他服務內(nèi)容感覺不到太大差別?!鼻笆隼钕壬硎?。
“不能將私人銀行簡單理解為比貴賓理財門檻高。私人銀行和貴賓理財是截然不同的概念,兩類客戶性質(zhì)不同,需求也不同?!惫獯筱y行零售業(yè)務部總經(jīng)理張旭陽在接受《投資者報》記者采訪時表示。
“我們光大定的私人銀行門檻是1000萬,其實這不僅是資金門檻,也是不同客戶需求的門檻,這個級別的客戶需要的是財富傳承、財富轉移、離岸金融、海外投資等,同時這類客戶背后通常還有企業(yè),他們不僅關心自身財富保值增值,也關心企業(yè)并購、上市等,與貴賓客戶需求截然不同?!睆埿耜栒f。
二者在服務上也不同,貴賓理財是一位客戶經(jīng)理對應一位客戶,一個產(chǎn)品服務多個客戶,向客戶銷售的是產(chǎn)品;而私人銀行服務則是一群客戶經(jīng)理服務一位客戶,向客戶銷售的是投資組合?!肮獯笏饺算y行現(xiàn)在定的模式是‘1+1+N’,包括一名私人銀行客戶經(jīng)理,一支由金融產(chǎn)品專家、投融資技術專家組成的投資顧問團隊以及由光大銀行總行支持的專家團,成員囊括總行公司部、投行部、資金部、同業(yè)部、中小企業(yè)部等部門?!睆埿耜柋硎?。
但在信托、基金、PE/VC、第三方理財?shù)葯C構的眼里,私人銀行像一個銷售平臺?!八饺算y行自己沒有什么投資產(chǎn)品可直接提供給客戶,那就相當于給我們提供一個地方,來銷售我們的產(chǎn)品?!眲⒘曈抡f。
張旭陽認為之所以客戶和外界有這樣的誤解,主要原因有二。一是中國私人銀行剛起步,還沒有完全達到應有標準,二是中國實行分業(yè)經(jīng)營,私人銀行需要打通不同金融機構的邊界。
向全權委托轉變
目前,中國私人銀行業(yè)尚未形成明顯的行業(yè)競爭格局,且私人銀行的服務仍保留著傳統(tǒng)零售銀行業(yè)務的色彩。
中資私人銀行業(yè)務組織模式主要有兩種:大零售模式和(準)事業(yè)部制模式,其核心問題是解決私人銀行同零售銀行業(yè)務及私人銀行業(yè)務相對獨立運營與總分行體制的協(xié)同問題。兩種模式既有不同又有共性。具體到每家銀行,同種模式下不同銀行又存在一定差異,其抉擇取舍一度引發(fā)廣泛討論和爭議。
前述《報告》認為中資銀行在私人銀行業(yè)務組織模式方面尚沒有成功的、可復制的范例。
光大的私人銀行模式就屬于大零售模式,其組織架構方面,相關業(yè)務部門采用相對扁平化的管理,該行將其定義為“總分行聯(lián)動”模式。
據(jù)張旭陽介紹,私人銀行在經(jīng)歷了從賣產(chǎn)品到賣組合的轉變后,下一步考慮未來要實現(xiàn)全權委托資產(chǎn)管理。
目的 探討2型糖尿病(T2DM)病人頸動脈內(nèi)膜增生與胰島素抵抗及代償性高胰島素血癥的關系。方法 對152例已確診T2DM病人采用超聲測定頸動脈內(nèi)膜中層厚度(IMT),選擇其中96例IMT
【關鍵詞】 糖尿病 2型 頸動脈 內(nèi)膜中層厚度 胰島素抵抗
[ABSTRACT] Objective To observe the relationship between carotid artery intima thickness (CAIT) and insulin resistance in pateints with type 2 diabetes. Methods CAIT was measured ultrasonographically in 152 patients with type2 diabetes, of whom, 96 patients defined as being free of plaque (CAIT
[KEY WORDS] Diabetes mellitus, type 2; Carotid artery; Intima media thickness; Insulin resistance
胰島素抵抗被認為是2型糖尿病及動脈粥樣硬化(AS)的共同危險因素[1]。對數(shù)化的穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗評估指數(shù)(lnHOMAIR)可以作為胰島素抵抗的可靠指標[2]。頸動脈內(nèi)膜中層厚度(IMT)增厚作為早期動脈粥樣硬化的表現(xiàn),已越來越引起人們的關注。本研究對2型糖尿病病人頸動脈IMT增厚進行了檢測,旨在了解其與胰島素抵抗和高胰島素血癥的關系, 并探討其發(fā)生機制。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇符合世界衛(wèi)生組織1999年診斷標準的2型糖尿病病人152例,均排除酮癥酸中毒等糖尿病急癥,心、肝、腎功能在正常范圍,采用口服抗糖尿病藥物治療,近1個月內(nèi)未使用胰島素。采用多普勒超聲探測152例病人雙側頸總動脈,排除存在動脈斑塊形成者56例,入選病人96例,根據(jù)IMT分為IMT正常組(IMT≤0.9 mm)47例和IMT增厚組(0.9 mm
1.2 方法
1.2.1 IMT的測定 用惠普公司5500多普勒超聲儀(7.5 Hz探頭)測定,病人取仰臥位, 縱向超聲顯像可見相對低回聲分隔的兩條平行亮線,兩線間距離即頸動脈IMT,取左、右頸動脈竇下1 cm處分別測量3次,取其均值即為平均頸總動脈IMT[3]。IMT>0.9 mm為增厚,動脈壁局限回聲結構突出管腔,厚度≥1.3 mm定義為斑塊形成[4]。
1.2.2 生化指標測定 病人于入院當天20:00時開始禁食,次日6:00時空腹靜臥抽取靜脈血,離心提取血清,采用日本Olympus 640生化儀測定空腹血糖(FPG)、超敏C反應蛋白(hsCPR)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDLC)、低密度脂蛋白(LDLC)、纖維蛋白原(FIB)水平;采用美國雅培公司Axsymplus發(fā)光儀測定受試者空腹血清胰島素(FINS)水平。計算穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗評估指數(shù)(HOMAIR)。HOMAIR =(FPG×FINS)/22.5[5]。
1.3 統(tǒng)計學處理
結果以±s表示。HOMAIR因呈偏態(tài)分布,作對數(shù)轉換后以±s表示。兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗,相關分析采用多元逐步回歸分析。
2 結果
IMT正常組、IMT增厚組病人年齡、血壓、BMI和性別比例等基本資料比較,差異無顯著意義(P>0.05)。見表1。
表1 兩組病人一般資料比較(略)
IMT增厚組的lnHOMAIR、FINS、hsCRP和LDLC均明顯高于IMT正常組,差異有統(tǒng)計學意義(t=2.260~3.444,P
多元逐步回歸分析表明,以IMT作為應變量,年齡、FINS、FPG、lnHOMAIR、TC、TG、HDLC、LDLC、hsCRP、SBP、DBP作為變量,用多元逐步回歸篩選變量,進入方程的變量為年齡、FINS、lnHOMAIR,標準化回歸系數(shù)分別為0.011、0.105、0.181(P
表2 兩組病人生化指標和胰島素抵抗指標比較(略)
與IMT正常組比較,*t=2.527、2.260、3.444,P
表3 2型糖尿病頸動脈IMT作為因變量的多元逐步回歸分析結果(略)
3 討論
胰島素抵抗在眾多血管疾病的危險因素中處于核心地位,是2型糖尿病和動脈粥樣硬化(AS)的共同發(fā)病基礎。2型糖尿病病人多有胰島素抵抗及高胰島素血癥。高胰島素血癥可刺激動脈平滑肌增生并由中層向內(nèi)皮移位,促進動脈粥樣硬化形成;同時,高胰島素血癥可刺激結締組織增生及各種生長因子在動脈壁沉積,促進內(nèi)皮細胞中內(nèi)皮素1基因表達,增加內(nèi)皮素受體數(shù)量和內(nèi)皮素的縮血管作用。胰島素抵抗狀態(tài)下機體分泌過多的免疫原性胰島素,使血漿纖溶酶原激活物抑制因子1 mRNA表達增加,促進血液凝固,降低纖溶酶活性,導致血管病變[6~8]。胰島素抵抗還可以使機體處于一種亞臨床的、低程度的應激狀態(tài),緩慢、輕微地啟動機體的免疫系統(tǒng),或促使某些細胞因子直接作用于免疫系統(tǒng),從而誘發(fā)機體出現(xiàn)持續(xù)、輕微的慢性炎癥,引起動脈粥樣硬化[9]。胰島素抵抗和高胰島素血癥促進了動脈粥樣硬化的發(fā)展,并與其他因素相互作用形成惡性循環(huán)[10,11]。作為動態(tài)定量觀察早期動脈粥樣硬化進展或消退的指標,頸動脈IMT較斑塊更有價值[12]。IMT的診斷標準不一,《歐洲高血壓指南》中將IMT>0.9 mm作為動脈粥樣硬化靶器官損害的標志。
本文結果顯示,2型糖尿病病人頸動脈IMT增厚主要與年齡、FINS和lnHOMAIR有關。IMT增厚組FINS、InHOMAIR高于IMT正常組,提示胰島素抵抗和代償性高胰島素血癥是2型糖尿病病人早期動脈粥樣硬化的重要因素。另外,IMT增厚組HDL、LDL及hsCRP與IMT正常組有顯著差異,提示脂質(zhì)代謝紊亂及炎癥可能與2型糖尿病病人早期動脈粥樣硬化有關。
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關鍵詞:內(nèi)皮前體細胞;分離;培養(yǎng);誘導;表面標志; 流式細胞儀
In vitro phenotype maintenance and proliferation of induced endothelial progenitor cells derived from human peripheral blood
【Abstract】Background and Objective:The present aim is to study the isolation,inducement and identification of endothelial progenitor cells(EPCs) from peripheral blood mononuclear cells(PBMCs),and to probe into its biological activity in vitro for the angiogenesistherapy. Methods:Total mononuclear cells (MNC) were isolated from peripheral blood by Ficoll density gradient centrifugation, and then the cells were plated on fibronectin coated culture dishes,and cultured in EGM-2 MV,Which contains VEGF,bFGF,IGF,EGF. After incubation for 4days, the non-adherent cells were removed, and fresh culture medium was applied. At the same time, adherent cells which were double positive for Dil-AC-LDL-up take and lectin binding by direct fluorescent staining were observed under fluorescent and confocal laser microscope respectively .On the seventh days, Adherent cells were further identified by demonstrating the expression of CD34, and CD31 with flow cytometry.. Results:After 1d in culture , shape changed cells were observed. After 2d in culture, large cell clusters appeared.After 3d in culture, around these clusters some adherent cells were observed. After incubation for 4 days, attached cells grewto short spindle-shaped and double positive staining for Dil-AC-LDL and UEA-1 can be observed under a fluorescent microscope. On the seventh day,F(xiàn)ACS analysis ,the adherent cells were positive for CD34 (14.13±2.79)% and CD31(54.67±3.44)%. Conclusion:EPCs exist in the peripheral blood,and can be differentiated into mature endothelial cells( ECs) by the stimulation of VEGF,bFGF, IGF and EGF. EPCs can be an appropriate way of the angiogenesis therapy.
[Key word] EPCs;isolation;culture; inducement;surface markers
1997年Asahara 等[1]第一個描述了人外周血存在內(nèi)皮前體。隨后的研究表明,來自骨髓的循環(huán)內(nèi)皮前體細胞(circulating endothelial progenitors CEPs)遷移到生理或病理條件下的新血管形成位點并原位分化成內(nèi)皮細胞,且能快速和及時地修復損傷的血管[2-4]。血管的損傷可
誘導化學因子,如VEGF、bFGF的釋放,促進骨髓來源的EPCs快速募集到損傷位點[5,6]。本文通過人外周血EPCs的分離和培養(yǎng),探討了其體外誘導分化的生長增殖規(guī)律和特性,以期作為病理條件下提供血管新生潛在源泉的治療手段。
1 材料與方法
1.1材料:
健康成年人新鮮的外周血20ml(所有健康者都沒有CAD傾向)淋巴細胞分離液(Ficoll液,天津市川頁生化制品有限公司);內(nèi)皮生長介質(zhì)EGM-2 MV(Clonetics);人纖連蛋白(HumanFibronectin.Chemicon);PE標記的CD34單克隆抗體(QIAGEN);FITC標記的CD31單克隆抗體(DIACLONE);PE標記的KDR單克隆抗體(Santa Cruz BIOtechnology,InC);Dil標記的乙?;牡兔芏戎鞍祝―il-AC-LDL Biomedical Technologies Inc);FITC標記的荊豆凝集素-1(FITC-UEA-1 Vector Laboratories Inc); 倒置顯微鏡(OLYMPUS CK2);熒光顯微鏡(OLYMPUS BX50));共聚焦激光掃描顯微鏡(TCS-SP2)。
1.2.方法:
1.2.1 外周血單個核細胞的分離與培養(yǎng):Ficoll液密度梯度離心提取單個核細胞,接種在人纖連蛋白(5ug/cm2)包被的24孔培養(yǎng)板上,置于37℃、5%的CO2、飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)4d后,去除未附著細胞,繼續(xù)培養(yǎng)黏附細胞至第7d,倒置顯微鏡觀察其生長情況。
1.2.2 EPCs的染色:單個核細胞培養(yǎng)4d后,去除未附著細胞,向培養(yǎng)孔中加入Dil-AC-LDL(2.4ug/ml),37℃避光孵育2h,加入2%的多聚甲醛固定20min,37℃的PBS沖洗3次,每次5min,再與FITC-UEA-1(10ug/ml)一起避光孵育1h,PBS沖洗3次,熒光顯微鏡觀察細胞,每孔多個視野計數(shù)。
1.2.3 流式細胞儀檢測:單個核細胞培養(yǎng)第7d,用0.25%的胰蛋白酶/0.02%EDTA,收集5×105個黏附細胞分別與抗人的單克隆抗體:PE標記的CD34、FITC標記的CD31,PE標記的KDR在室溫孵育30min,以同種型單克隆抗體作為陰性對照,PBS沖洗,4%的多聚甲醛固定,流式細胞儀檢測。
2 結果
2.1 單個核細胞的分離與培養(yǎng):離心后,單個核細胞密度與分層液密度相當,密集在血漿層和分層液的界面中,呈白膜狀。單個核細胞在鋪有人纖連蛋白以及加入生長刺激因子的EGM-2MV培養(yǎng)基上培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài),1d后,一些細胞變形;2d后, 可見大量的細胞團形成,3d后,細胞團周圍一些貼壁細胞開始出現(xiàn);4d后去除未附著細胞,細胞貼壁生長,內(nèi)皮細胞呈扁平的短梭形或多角形,大小均勻,胞核清晰,呈卵圓,有核的區(qū)域比無核的區(qū)域突出。在5d時生長最快,梭形細胞的大小和數(shù)量都明顯增加,細胞呈單層鵝卵石樣或鋪路石樣鑲嵌狀排列生長。大約在培養(yǎng)的第7d,可見長梭形細胞以細胞團為中心呈放射狀生長,同時,也可見散在的長梭形細胞。(如圖Fig1)。
2.2 EPCs的染色:單個核細胞培養(yǎng)4d后,黏附細胞與Dil-AC-LDL一起孵育,再與FITC-UEA-1一起孵育,熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡下觀察,Dil-AC-LDL呈紅色熒光,FITC-UEA-1呈綠色熒光,出現(xiàn)這種雙陽性熒光的細胞即被鑒定為EPCs(如圖Fig2)
2.3 流式細胞儀檢測:單個核細胞培養(yǎng)第7d ,F(xiàn)ACS分析,CD34和CD31陽性細胞陽性率分別為 (14.13±2.79)%、(54.67±3.44)%。(如圖Fig3)
3 討論:
從成年人的骨髓中分離到的EPCs為CD133+/CD34+/KDR+,成人外周循環(huán)血中,更成熟分化的內(nèi)皮前體細胞(CEPs),其CD133表達降低,成熟黏附的ECs為CD133-/KDR+,很明顯,EPCs在分化過程中失去了CD133的表達[2]。因此外周循環(huán)血中比CEPs更成熟的內(nèi)皮前體是CD34+/ KDR+/CD31+/VE-cad+,并開始表達血管血友病因子vWF。目前認為CD133是區(qū)別內(nèi)皮前體細胞與成熟內(nèi)皮細胞的主要標志[2,7],成人的外周血可作為EPCs的一個源泉,從外周血獲取EPCs是最快捷和方便的方法,而外周血中EPCs的數(shù)量相當有限,因此,外周血中EPCs的分離、體外誘導與分化,以及適當?shù)呐囵B(yǎng)條件的探索是必要的。在本研究中,我們可以看到EPCs從外周血中被分離出來,在鋪有人纖連蛋白的24孔培養(yǎng)板中黏附、增殖,并且分化在有VEGF、bFGF、IGF-1和EGF存在的培養(yǎng)液中短時間內(nèi)完成。
單個核細胞培養(yǎng)7d后,F(xiàn)ACS分析,CD34、CD31、KDR都有表達,說明單個核細胞在EGM-2 MV培養(yǎng)液中,經(jīng)過7d的培養(yǎng),誘導分化出了EPCs,MNCs在人纖連蛋白上培養(yǎng)4d后,去除未附著細胞,鏡下可見大量的細胞團形成。在第5d時生長最快,梭形細胞的大小與數(shù)目都增加。大約在培養(yǎng)第7天,可見長梭形細胞以細胞團為中心呈放射狀生長,細胞團中心為圓形細胞,周邊為梭形細胞。培養(yǎng)中出現(xiàn)形態(tài)特征與胚胎發(fā)育時期血島相類似的細胞團。呈梭形的內(nèi)皮樣的黏附細胞與Dil-AC-LDL一起孵育,再與FITC-UEA-1一起孵育,熒光顯微鏡下觀察,Dil-AC-LDL呈紅色熒光, FITC標記的UEA-1呈綠色熒光,雙陽性熒光(黃色)的細胞即被鑒定為EPCs。
在細胞的遷移試驗中[8],MNCs培養(yǎng)第7d,用胰酶收集2×104個貼壁細胞,懸浮在50μl培養(yǎng)液注入上室,然后將25μl培養(yǎng)液和VEGF (50ng/ml)加入改良的Boyden小室的下室,37℃培養(yǎng)24h,清去濾膜上面的未遷移的細胞,用甲醛固定,Giemsa 染色,顯微鏡下3個隨機選擇視野(×400),計數(shù)遷移到下層的細胞,遷移率為48.34±1.34%。細胞的遷移試驗表明,EPCs對應于VEGF具有遷移功能。目前認為VEGF是最有效的動員EPCs的外源性動員劑,能促進內(nèi)皮細胞遷移,并促使其分裂、增殖和分化,從而促進新生血管的修復與生成。
本研究是從單個核細胞誘導EPCs,進行的是EPCs的短期培養(yǎng),通過EPCs體外生長增殖規(guī)律的觀察,旨在探討EPCs體外誘導分化的方法,以期為EPCs的功能研究及血管生成的細胞治療打下基礎。有資料表明[4],該培養(yǎng)誘導的EPCs很大一部分來源于CD14+單核細胞的轉分化,在長期培養(yǎng)(多于2周),EPCs來源于有驚人的增殖能力的內(nèi)皮克隆,作為對造,單核的EPCs的增殖較緩慢,并且在2-3周內(nèi)死去。但是兩種來源的(CD14-和單核CD14+細胞)細胞治療潛能在體內(nèi)都有效:兩種亞群的細胞在小鼠的后肢缺血模型中都顯示能滲入到血管結構中,并明顯地增強了新血管化。
Fig1:倒置顯微鏡下,EPCs的體外生長增殖的動態(tài)觀察(×200)。
(A)剛分離接種1d的MNCs 。(B)培養(yǎng)2d,有細胞團形成,一些細胞開始變形。
(C)培養(yǎng)3-4d,細胞團周圍有一些貼壁細胞出現(xiàn)。(D) 培養(yǎng)5d, 貼壁細胞成
短梭形。(E) 培養(yǎng)6d,貼壁細胞明顯增加。(F) 培養(yǎng)7d,貼壁細胞為長梭形。
Fig2:M NCs培養(yǎng)第5d,熒光顯微鏡下觀察攝取Dil-AC-LDL(紅色)、
聯(lián)結FITC-UEA-1(綠色),的雙陽性的黏附細胞。
Fig 3:MNCs在鋪有人纖連蛋白以及EGM-2MV培養(yǎng)基上培養(yǎng)第7d,F(xiàn)ACS分析,
CD34 、CD31陽性細胞率分別為:(14.13±2.79)%、(54.67±3.44)%。
A:CD34+細胞的陰性對照。B:培養(yǎng)7d后的CD34+細胞。C.CD31+細胞的陰性
對照。D.培養(yǎng)7d后的CD31+細胞。
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